细胞表面抗原检测FACSVIP免费

淋巴细胞表面标志的检测——FACS法免疫细胞检测淋巴细胞的采集和分离总数检测T亚群检测淋巴细胞表面抗原检测—免疫荧光法原理荧光素标记的特异性抗体与淋巴细胞表面相应抗原结合，使淋巴细胞带有荧光素，在一定波长的激发光作用下产生荧光，可用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。流式细胞仪的基本原理：将细胞形成高速细流而从喷嘴逐个流出，经激发光照射后产生的荧光信号等由感光元件探测，通过计算机自动处理各种数据，可以测得每个细胞的荧光强度、细胞大小等物理特征。流式细胞仪流式细胞仪流式细胞仪全自动双激光四色流式细胞分析分选系统个人型双激光四色流式细胞仪流式细胞仪的特点单个细胞分析同时多参数分析速度快：10000个细胞/秒统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况分选感兴趣的细胞流式细胞仪系统流程：标本→激光系统→流动系统→信号处理系统→放大系统→计算机系统→结果打印激发光发射光AntiCD3Tri-color:488nm670nmAntiCD4R-PE:488nm575nmAntiCD8FITC:488nm525nm前向角度散射光强度侧向散射光强度操作步骤（4人一组）吸取抗凝全血100ul，加5ul荧光素标记抗体(CD3/CD4/CD8)。混匀，室温避光孵育20分钟。加溶血素1ml，混匀，室温避光裂解红细胞10分钟。离心1500rpm，5分钟，弃上清；加PBS缓冲液1ml，1500rpm，5分钟，弃上清。加PBS缓冲液400ul悬起细胞，移入FACS专用管。流式细胞仪检测。注意事项：对照设置：其好坏、齐全，决定对结果的解释和结论的可信性。阴性对照、同型对照（Isotypecontrol）、单染色对照单细胞悬液：（不允许上机样品含有胎牛血清）优化实验条件：（细胞数+抗体量）同型对照(IsotypeControl)是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。是真正意思上的阴性对照，它可以用来设定流式细胞仪的电压。一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。