基 因 定 点 突 变 全 攻 略 一 、 定 点 突 变 的 目 的 把 目 的 基 因 上 面 的 一 个 碱 基 换 成 另 外 一 个 碱 基 。 二 、 定 点 突 变 的 原 理 定 点 突 变 是 指 通 过 聚 合 酶 链 式 反 应 ( PCR) 等 方 法 向 目 的 DNA 片 段 ( 可 以 是 基 因 组 , 也可 以 是 质 粒 ) 中 引 入 所 需 变 化 ( 通 常 是 表 征 有 利 方 向 的 变 化 ) , 包 括 碱 基 的 添 加 、 删 除 、 点突 变 等 。 定 点 突 变 能 迅 速 、 高 效 的 提 高 DNA 所 表 达 的 目 的 蛋 白 的 性 状 及 表 征 , 是 基 因 研 究 工作 中 一 种 非 常 有 用 的 手 段 。 体 外 定 点 突 变 技 术 是 研 究 蛋 白 质 结 构 和 功 能 之 间 的 复 杂 关 系 的 有 力 工 具 ,也 是 实 验 室 中 改造 /优 化 基 因 常 用 的 手 段 。 蛋 白 质 的 结 构 决 定 其 功 能 , 二 者 之 间 的 关 系 是 蛋 白 质 组 研 究 的 重点 之 一 。 对 某 个 已 知 基 因 的 特 定 碱 基 进 行 定 点 改 变 、 缺 失 或 者 插 入 , 可 以 改 变 对 应 的 氨 基 酸序 列和 蛋 白 质 结 构 ,对 突 变 基 因 的 表 达 产物进 行 研 究 有 助于人类了解蛋 白 质 结 构 和 功 能 的 关系 , 探讨蛋 白 质 的 结 构 /结 构 域。 而利 用 定 点 突 变 技 术 改 造 基 因 :比如野生型的 绿色荧光蛋白 ( wtGFP) 是 在紫外 光激发下能 够发出微弱的 绿色荧光, 经过 对 其 发光结 构 域的 特 定 氨 基酸 定 点 改 造 , 现在的 GFP 能 在可 见光的 波长范围被激发( 吸收区红移) , 而且发光强度比原来强上 百倍, 甚至还出现了黄色荧光蛋 白 , 蓝色荧光蛋 白 等 等 。 定 点 突 变 技 术 的 潜在应 用 领域很广, 比如研 究 蛋 白 质 相互作 用 位点 的 结 构 、 改 造 酶 的 不同活性 或 者 动力 学特 性 , 改 造 启动子或 者 DNA 作 用 元件, 提 高 蛋 白 的 抗原 性 或 者 是 稳定 性 、 活性 、 研...