基因工程实验注意事项 1 ． 上实验课不能迟到。 2 ． 一定要提前预习实验内容，弄懂实验原理，理清实验顺序。根据实验内容和步骤制定一个详细的试验计划（没有计划或计划不合理者不能进入实验操作）。 3 ． 实验指导中所写的实验一、实验二等并非严格的实验顺序，只是提供一种相关的实验操作技术。各小组学生需要根据整体的实验策略制定自己的实验顺序和计划。 4 ． 由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹安排。 5 ． 本实验课中的所有实验都属于从克隆到表达的整体流程，时间上没有上下午晚上休息等严格的作息安排，一切服从实验进度，但必须在 1 0 天之内完成。 6 ． 实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！ 7 ． 对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。 8 ． 写作实验报告一定要文字整洁，观察记录详细（包括操作的错误），分析现象透彻。 9 ． 在实验室内不能大声喧哗。 1 0 ．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地投弃！ 1 1 ．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验实。 1 2 ．值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。 1 3 ．实验时损坏的任何物品都要按规定赔偿。 实验流程参考图 第一部分 质粒D N A 的提取和酶切电泳鉴定 实验一 质粒D N A 的小量制备 1．目的 学会最常用的小量制备质粒的DNA 的碱裂解方法。 2．原理 根据共价闭合环状质粒DNA 与线性 DNA 在拓扑学上的差异来分离。在 pH12.012.5这个狭窄的范围内，线性 DNA 双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA 也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入 pH4.8 的乙酸钾高盐缓冲液使 pH 恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA 复性快速，而线性的染色体 DNA 复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子 RNA 一起沉淀下去。 PCR 扩增 NK 制备感受态菌 DH5a, BL21 提质粒pMD18-T-NK，pET-his，EcoRI+BamHI 酶切 与 pUCm-T 连接 转化 DH5a 筛选鉴定 提质粒pUCm-T-NK 回收 pET-his EcoRI+BamHI 酶切 回收 NK 片断 pET-his-NK 诱导表达 SDS-PAGE 鉴定 转化 DH5a 连接 ...
