基因组文库 一 基因文库概述 随着分子生物学的迅速发展，对基因结构，功能及其调控的研究越来越深入，而特定基因，特定DNA序列的分离是上述研究的基础。生物工程产业的发展也越来越要求分离出在医药，工农业上有应用价值的基因。因此，分离在研究和产业化应用中所需要的母的基因，改进目的基因的性状和调控功能是基因工程的重要任务。可以说，基因工程的根本目标之一就是分离编码蛋白质的基因。分离所需的目的基因，除了化学合成 DNA和 PCR技术之外，主要来自基因文库。构建完整的基因组文库，就可能筛选和获得该物种基因组的任何 DNA片段。从 cDNA文库中获得正在表达的基因，是许多目的基因的主要来源。从化学合成和 PCR扩增获得的基因或 DNA片段都是已知的，而从基因文库可以筛选比较完整的，该生物中未知的基因或 DNA序列。 1.基因文库的概念 获得一个目的基因或新的未知基因对分子生物学的理论研究或基因工程的应用都具有重要意义。分子克隆的重要目标是获得某个基因或 DNA片段。获得一个新的基因，一般需要从构建 DNA文库实现。分子克隆的主要策略是构建基因文库和筛选文库。不同来源的外源 DNA不同种类的文库。从基因组DNA或者从细胞总 mRNA合成 cDNA，与某一克隆载体重组，重组DNA导入宿主细胞，所有这些克隆的总和组成基因文库。 概括来说一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体 DNA分子中，所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的基因文库。 基因文库就像是生物信息的存储库，基因的图书馆，在需要某种特定基因或 DNA序列时，可以从中筛选获得。 2.基因文库的分类 基因文库主要有两类，基因组文库和cDNA文库。两种文库构建的基本程序大致相同，主要包括载体的制备，插入片段的制备，载体与插入片段的连接和重组DNA分子导入宿主细胞，两种文库筛选的策略和方法也相似，多是以经过标记的基因片段为探针，通过核酸杂交试验来筛选。但两种文库的遗传信息与应用范畴都不同。 基因组文库，插入的是基因组DNA，是一种生物体全部染色体 DNA被随机切割成适当大小片段后插入到克隆载体内构成的基因文库。理论上，一个基因组文库的全部重组克隆应该包括该生物遗传信息的总和。很多真核生物全部染色体实在太大，因此染色体分离后，不同的染色体分别独立构建单个染色体的基因组文库，称为部分基因组文库。构建基因文库的目标...
