1 / 10 分子生物学实验报告 实验内容：设计一个完整的实验，以水稻基因组为例，最终得到纯化的一个基因片段。 水 稻 基 因 组 DNA提 取 ， PCR， 纯 化 分 子 生 物 学 实 验 报 告 --第 1页水 稻 基 因 组 DNA提 取 ， PCR， 纯 化 分 子 生 物 学 实 验 报 告 --第 1页 2 / 10 水稻基因组DNA提取以及基因片段的扩增、纯化和检测 1.实验目的： 1.1 熟练掌握实验室分子生物学相关的仪器的规范使用方法 1.2 遵守实验室相关的实验规章制度，服从实验人员的管理 1.3 熟练掌握实验室有关植物基因组DNA的简单提取方法以及检测方法 1.4 了解琼脂糖凝胶电泳的原理，掌握胶体制备的方法以及电泳仪的操作方法 1.5 掌握PCR技术的操作流程，熟练使用PCR仪并了解其工作原理及检测方法 1.6 了解柱纯化的原理及使用方法 2.实验原理 1）水稻叶片基因组DNA提取 水稻属于真核生物，其DNA以双链线性高分子形式存在于细胞核中，一般以染色质形式在。由于植物组细胞破裂之后，DNA酶会水解DNA因此在提取过程总要加入 EDTA螯合剂从而抑制DNA酶活性。 水稻叶片基因组DNA的提取主要是通过破碎组织和细胞从而通过对细胞内其他杂质的去处来达到基因组DNA的提纯。提纯的产物通过 1% 的琼脂糖凝胶电泳进行检验。 本实验是通过 CTAB法来进行提取的，它是一种阳离子表面活性剂，能溶解细胞膜和和核膜蛋白，使核蛋白解聚从而使DNA游离出来，已达到分离的目的。 2）特定基因片段的PCR 扩增 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在95℃水 稻 基 因 组 DNA提 取 ， PCR， 纯 化 分 子 生 物 学 实 验 报 告 --第 2页水 稻 基 因 组 DNA提 取 ， PCR， 纯 化 分 子 生 物 学 实 验 报 告 --第 2页 3 / 10 下解链;(2)退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(55℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在TaqDNA 聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的DNA 为模板进行合成.由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经30 轮循环就可使DNA扩增上百倍。 3）PCR 产物的纯化 PCR产物的纯化在本实验中是通过柱纯化的方法进行的。试剂盒吸附...
