ELISA 检测-----固相捕获法测 IgM 抗体在病原体急性感染的诊断中，通常需检测 IgM 抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗 HAVIgM 检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗 HBclgM 检测和 TORCH 项目的系列 IgM 检测等。IgM 抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些 TORCH 系列的 IgM 检测试剂盒。在使用间接法测 IgM 抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的 IgG 抗体，其中部分特异 IgG 抗体将与 IgM 抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰 IgM 抗体的检测。因此，在使用间接法测定 IgM 抗体时，通常须将血清样本用抗人 IgG 抗体或 SPA 预处理，以去除 IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的 IgM 抗体检测方法为捕获法，即以抗人 IgM 抗体（抗人 u 链）作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的 IgM 类抗体（特异的和非特异的）即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的 IgM 抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下：1 首先将抗人 IgMbt 链抗体于碳酸盐缓冲液中 40c 下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。2•加入含待测 IgM 抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的 IgM 抗体就会与固相上的抗 P 链抗体反应而吸附于固相上。3•加入特异的抗原如 HAV 抗原、HBcAg 等,温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异 IgM 抗体发生反应。4•加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。5•加入酶底物，温育显色测定本方法要着重注意的是 RF（1gM 类）及其他非特异 IgM 的干扰。RF（1gM 类）由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体（动物 IgG）反应，从而导致假阳性反应。而非特异 IgM 由于其在第一步温育中，可与特异 IgM 竞争与固相抗体结合，所以会影响测定的灵敏度。因此，使用本法测IgM，必须对临床样本进行适当稀释。样本稀释后，上述产生干扰作用的非特异 IgM 含量减少，而特异IgM 由于处于相应病原体的急性感染期，滴度很高，一定稀释后，不会有明显影响，况且，在某些病原体BD9QnDL-RF 疏谑如 HBV 的慢性感染阶段，IgM 类特异抗体也能持续存在...
