口腔生物学实验教程提要：口腔生物学实验教程是针对口腔生物学理论课设计的实验指导内容。其教学目的是让学生通过实验，掌握基本的口腔生物学研究技术和方法，加深对理论课所学知识的理解，培养学生对口腔医学基础研究的兴趣，了解基本的科研设计思路，启发学生的科研思维。内容目录第一节口腔微生物学实验实验一菌斑的采集、染色和观察、分类实验二变异链球菌的分离和鉴定实验三细菌代谢酸的测定实验四细菌细胞外葡聚糖的测定实验五菌斑中pH值的测定第二节口腔生物化学实验实验六龈沟液中碱性磷酸酶活性的测定实验七唾液钙和磷含量的测定实验八唾液分泌情况的测定第三节口腔疾病分子生物学实验九以釉原蛋白基因进行性别鉴定第四节骨组织生物学和口腔细胞培养实验十成骨细胞的分离培养实验十一成骨细胞的分离培养实验十二MTT法检测细胞活性实验十三肿瘤细胞迁移实验（细胞划痕法）内容目录第一节口腔微生物学实验实验一菌斑的采集、染色和观察、分类实验目的与要求:掌握牙菌斑标本的采集、处理和常用染色——刚果红（congored）负性染色的主要程序和方法，熟悉龈上或龈下菌斑中常见细菌的形态及分类方法。实验内容:菌斑标本的采集；细菌涂片的制备、染色；染色细菌的观察及Listgarten分类。实验设备和器材等用品：香柏油，二甲苯，菌斑染色剂，酒精，浓盐酸和灭菌的液状石蜡等。无菌牙科镊子、挖匙或探针（龈上菌斑检查用），载玻片，灭菌取菌环可卸式取菌器或消毒滤纸（龈下菌斑采集用），含预还原转送培养基的带盖小瓶，普通光学显微镜，试镜纸，细菌接种环及装有固体培养基的培养皿等。第一节口腔微生物学实验实验方法：漱口、隔湿→刮取牙面菌斑可摘式取菌器或灭菌纸尖吸取龈沟或牙周袋菌斑立即置转送液中密闭震荡、分散菌斑团块涂片革兰负性染色观察细菌形态分类菌斑采集和处理染色观察分类第一节口腔微生物学实验①龈沟内采集法②牙周袋内采集法龈沟或牙周袋的龈下菌斑采集法第一节口腔微生物学实验刚果红负性染色方法：Listgarten的分类标准：载玻片一端滴一滴2%刚果红染液加入待见样本混合后推片置浓盐酸上熏至变红色推片置显微镜下观察球菌：菌细胞直径μm～μm，包括少量球杆菌；直杆菌：菌细胞宽μm～μm，长μm～μm，包括部分分支杆菌；丝状菌：菌细胞宽μm～μm，长与宽之比大于6∶1，菌细胞多为不规则的长丝状杆菌；梭状菌：菌细胞直径μm～μm，长约10μm，其末端呈梭状；弯曲杆菌：菌细胞呈新月形或弯曲状；螺旋体：菌细胞宽μm～μm，长约10μm～20μm，螺旋形，包括大、中、小三种螺旋体。第一节口腔微生物学实验实验结果与分析：注意事项：1.染色操作中，用浓盐酸熏蒸涂片时要小心。2.该法不能检测细菌的活动性，但染色涂片可长期保存。思考题：刚果红负性染色有何优点？菌斑采集时应该注意什么？龈上菌斑涂片刚果红负性染色结果第一节口腔微生物学实验实验二变异链球菌的分离和鉴定实验目的和要求：通过对菌落特点和菌细胞形态及革兰染色特征的观察，初步掌握菌斑标本中变异链球菌的分离、培养和表型鉴定的主要程序和方法，熟悉牙菌斑中常见细菌的菌落特点、菌细胞形态及革兰染色特点。实验原理：变异链球菌能发酵蔗糖等多种碳水化合物，而其他口腔链球菌不发酵山梨醇和甘露醇；根据其菌落形态、染色特点及耐氧情况，以其特殊的生化反应可以分离和鉴定变异链球菌。实验内容：菌斑标本的采集处理接种和培养观察细菌表型鉴定次代培养生化鉴定转送第二节口腔生物化学实验主要实验设备和器材、试剂等：厌氧培养装置如简易厌氧袋、厌氧罐、厌氧培养箱或厌氧手套箱均可；普通孵箱，旋涡混合器，微量振荡器，和普通光学显微镜。可调式移液器、加样头，小试管，三角形推棒，接种环、酒精灯，载玻片，无菌棉签，96孔反应板，EP管；口腔检查用口镜，镊子，检查盘，无菌纱球，无菌探针和龈上锄形洁治器。革兰染色试剂，系列生化基质和指示剂（包括甘露醇、山梨醇、菊糖、精氨酸试剂、七叶苷水解试剂）。变异链球菌ATCC25175悬液。MS琼脂、BHI琼脂培养基、巯基乙醇酸盐转送液，、～的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)等。第一节口腔微生物学实验实验方法...
