红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 流感病毒表面的血凝素（HA）蛋白，含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构，能使一些特定的红细胞发生凝集现象。当红细胞和病毒按适当的比例混合后，由于病毒的作用使红细胞发生凝集，此为凝集现象。含有特异的抗流感病毒HA 蛋白的抗血清，能抑制红细胞凝集现象的出现，即抗体与病毒结合后，可以使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，此为红细胞凝集抑制（HAI）。 微量红细胞凝集抑制试验是目前最常用的一种鉴定流感病毒型/亚型及分析流感病毒HA 抗原性变异的试验方法，也可以用于对一般人群抗体水平的检测和疫苗效果的评价等方面。 用于HAI 试验的标准参照血清必须及时更新，用于鉴定流感病毒型/亚型应包括当年的国际疫苗株或国内流行代表株的抗血清，可以用羊、鸡、雪貂、兔等实验动物的抗血清；用于抗原分析的抗血清建议包括同一型别和亚型不同毒株免疫的标准参考抗血清，由于用雪貂制备的抗流感病毒血清特异性高，易将不同毒株间抗原性差异显示出来，因此常用免疫雪貂的抗血清进行抗原分析。HAI 试验中所用的血清必须经特殊处理以去除非特异性抑制素及非特异性凝集素。 （一）生物安全要求 所有有关试验操作都应在相应生物安全级别的实验室中进行，必须遵守生物安全规定，严格执行标准操作规程和废弃物管理规定，做好个人防护要求。季节性流感病毒病毒或经完全灭活的高致病性禽流感病毒操作可以在 BSL-2 实验室里进行，高致病性禽流感病毒的操作在BSL-3 级实验室中进行。 （二）实验所用试剂 1．标准参考抗原：以国际疫苗株和国内流行株作为标准参考抗原，新分离的毒株作为待测抗原。 2. 标准参考抗血清：以国际疫苗株和国内流行株制备的抗血清作为标准参考血清。血清要经RDE 处理。 （三）其他试剂/材料/仪器 1. 红细胞悬液 2. PH7.4 的PBS 缓冲液 3. RDE（日本生研） 4. 水浴箱（37℃，56℃） 5. 台式离心机 6. 多道可调加样器、单道可调加样器 7. 离心管 8. 96 孔微量血凝板（使用豚鼠和人红细胞进行实验须用“U”底板，使用火鸡红细胞进行实验用“V”底板） 9. 200µL、1000µLTIP 头、水槽 表 1. 流感病毒红细胞凝集试验各项条件比较 红细胞 火鸡 豚鼠 人“O”型血 终浓度 0.5 0.5 0.5 孔底部形状 V 型 U 型 U 型 孵育时间 25-30min 45-60min 45-60min 红细胞沉积形状 细胞沉积成点状，倾细胞沉积细胞沉积成斜时细胞向下流成泪滴状 成...
