动物免疫和多克隆抗体的制备多克隆抗体的产生示意图多克隆抗体(polyclonalantibody,pcAb)：天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物多克隆抗体的制备将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体抗原来源与动物种属的关系种属差异越远，免疫原性越强动物个体的选择适龄、健康、体重符合要求抗原的性质一、免疫动物的选择多克隆抗体制备的步骤抗原制备免疫动物采血收集血清免疫方法常用注射方法皮下注射注射到皮下组织内皮内注射注入表皮与真皮之间足底注射肌肉注射静脉注射腹腔注射单克隆抗体单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体这种抗体的重链、轻链及其V区独特型的特异型性、亲和力、生物学性状及分子结构均完全相同性质常规血清抗体单克隆抗体无关的Ig多少或几乎无其它血清蛋白有少，培养物上清常有10％胎牛血清Ag-Ab结合免疫原的全部成分的全部抗原决定簇免疫原中的一种成分的一个抗原决定簇特异性亲和力的重复性不同批号间有变化无变化与其它抗原的交叉反应与带有共同抗原决定簇的抗原有部分交叉一般无。结合到共同决定簇则是完全的免疫球蛋白的种类与亚类完全是混合的只是一种或几种单抗与多抗免疫原的剂量中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体免疫间隔时间第一次和第二次间隔两周左右，二次免疫后2周左右采血，检测抗体水平免疫途径皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结二、免疫程序抗体的鉴定和保存2℃～8℃保存：短期保存冰冻保存：保存1-5年真空干燥保存：保存5～10年抗体的保存目的1、掌握免疫原的制备方法2、掌握家兔背部皮下多点注身免疫的方法实验材料新西兰大白兔ISA206佐剂抗原注射器、毛剪等佐剂的作用方法•形成抗原贮存库，使抗原缓慢释放，延长抗原在局部组织的滞留时间，较长时间使抗原与免疫细胞接触并激发对抗原的应答•增加抗原的表面积，增高抗原的免疫原性，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位递呈给免疫细胞•促进局部的炎性反应，增强吞噬细胞的活性，促进免疫细胞的增殖与分化，诱导细胞因子的分泌油水乳剂水包油乳剂流动性高，有良好的相容性，可诱导强而短期的免疫反应油包水乳化剂能诱导强而长期的免疫，免疫过程只需要一次注射即可维持整个生长期的保护，但有时能引起局部反应。水包油包水乳化剂粘度低，能提高短期和长期的免疫反应，外部水相中的抗原就象水制剂一样可立即作用于免疫系统，而内部水相的抗原就象在油包水乳剂中一样缓慢释放。弗氏佐剂•弗氏完全佐剂：矿物油（液体石蜡）+乳化剂（羊毛脂）+灭活的结核分枝杆菌或卡介苗•弗氏不完全佐剂：不含结核杆菌步骤1、培养细菌，甲醛0.8%灭活，37℃，24h2、灭活菌经PBS洗涤两遍（4℃，5000rpm，10min），加等量PBS重悬3、加佐剂充分乳化：混合前将抗原与佐剂预热致相同的温度，注射器来回推动25次4、兔背部剪毛，4x10cm25、背部皮下多点注射：20点，0.05ml/点6、在初次免疫高峰后加强免疫7、加强免疫后7-10天，凝集实验检测抗体凝集效价，ELISA检测抗体滴度作业•动物免疫应注意哪些事项？•什么是佐剂，有什么特点？•简述单克隆抗体和多克隆抗体的区别。
