实验二交叉配血试验1.盐介质交叉配血试验2.酶介质交叉配血试验3.抗球蛋白介质交叉配血试验4.低离子聚凝胺介质交叉配血试验5.微柱凝胶介质交叉配血试验目的掌握抗人球法原理、方法原理在合适的温度及一定的反应条件下，IgG型血型抗体能与红细胞膜上相应抗原结合而使红细胞致敏，但多数IgG抗体不能在盐水介质中使致敏的红细胞出现肉眼可见的直接凝集。当加入抗人球蛋白抗体后，该抗体（二抗）可与包被在红细胞膜上的IgG类血型抗体（一抗）发生抗原抗体结合反应，通过抗球蛋白的“搭桥”作用，促使原来已致敏的红细胞发生肉眼可见的凝集。一、抗人球蛋白法配血试验器材小玻璃试管、滴管、试管架、记号笔、显微镜、离心机、37℃水浴箱、吸水纸。试剂抗人球试剂（多抗）、生理盐水。标本静脉血。1.标记试管，标明主侧、次侧2.加样主侧管：受血者血清2滴+供血者3～5%悬红1滴次侧管：供血者血清2滴+受血者3～5%悬红1滴3.离心1000g离心15s,不凝集继续以下实验。4.混匀，37℃水浴30min，盐水洗涤3次（快），扣干。5.加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，离心15秒。6.轻摇，观察结果。操作肉眼或镜下观察有无凝集结果判断及临床意义肉眼或显微镜下观察结果结果判断临床意义主、次侧均不凝集及溶血相合可以输注主侧或次侧凝集或溶血；两侧均凝集或溶血不相合不可以输注报告结果供血者xxx与受血者xxx盐水法和抗人球蛋白法进行交叉配血，主侧和（或）次侧管红细胞均无凝集及溶血。1.洗涤要迅速，中途不能停，洗彻底。2.严格把握离心速度和时间。3.观察结果时，须轻摇。4.先盐水观察，有溶血标本弃用。5.加阳性、阴性对照。主侧次侧交叉结束后，加1滴阳性对照细胞，离心后应有红细胞凝集，若不凝需重做。6.抗人球试验费时、繁琐，但灵敏度好、特异性强。注意事项目的掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。原理红细胞表面带有大量的负电荷，凝聚胺溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝集。悬浮液具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被相应的抗体致敏，则凝集就不会散开，试验结果为阳性。一、凝聚胺配血法器材小玻璃试管、滴管、试管架、记号笔、显微镜、离心机。试剂凝聚胺试剂盒。标本静脉血。1.标记试管：取试管两支，分别标明主侧次侧2.加样:主侧管：受血者血清2滴+供血者3～5%悬红1滴次侧管：供血者血清2滴+受血者3～5%悬红1滴3.离心1000g离心15s,不凝集继续以下实验。4.各加LIM溶液0.7ml，混匀，1-2min后，再各加Polybrene溶液2滴，混匀，置室温1分钟。5.1000g离心60s，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。6.轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。7.最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混匀1min内观察结果，看凝集是否散开。操作，1min内凝集不消失。结果判断及临床意义报告结果供血者xxx与受血者xxx盐水法和低离子聚凝胺介质法进行交叉配血，主侧和（或）次侧管红细胞均无凝集及溶血。注意事项1.肝素治疗患者，多加几滴聚凝胺以中和肝素。2.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操作。3.天冷时，冷凝集素会干扰交叉配血。4.按说明书操作。5.先盐水观察，再做聚凝胺法。作业11、哪些因素可影响抗人球蛋白交叉配血试验、哪些因素可影响抗人球蛋白交叉配血试验结果。结果。22、比较抗人球蛋白和凝聚胺交叉配血试验的、比较抗人球蛋白和凝聚胺交叉配血试验的原理、方法和异同点。原理、方法和异同点。下次课内容不规则抗体筛查与鉴定
