细胞转染技术原理及应用 第 1 页 共 6 页 常规转染技术分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β 半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。外源DNA 整合到染色体中概率很小，大约1/104 转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素 抗 性基因），潮 霉素 B 磷 酸 转移酶（HPH），胸 苷激 酶（TK）等反 复 筛 选，得 到稳定转染的同源细胞系。 转染技术的选择对 转染结果影 响 也很大，许 多转染方 法 需要优 化 DNA 与 转染试 剂 比例 ，细胞数量，培 养 及检测时间 等。一些传 统的转染技术，如DEAE 右 旋糖苷法 ，磷 酸 钙 法 ，电 穿 孔 法 ，脂 质体法 各有 利 弊 ，其主要原理及应用特 点 见 下 表： 转染方 法 原理 应用 特 点 磷 酸 钙 法 磷 酸 钙 DNA 复 合物 吸 附细胞膜 被 细胞内吞 稳定转染 瞬时性转染 不适 用于原代 细胞 操 作简 便 但重 复 性差 有 些细胞不适 用 DEAE-右 旋糖苷法 带 正 电 的DEAE-右 旋糖苷与 核 酸 带 负 电 的磷 酸骨 架 相 互 作用形 成 的复合物 被 细胞内吞 瞬时性转染 相 对 简 便 、 结果可重 复 但对 细胞有 一定的毒 副 作用 转染时需除 血 清 电 穿 孔 法 高脉 冲 电 压 破 坏 细胞膜电 位 ，DNA 通过膜 上 形 成的小孔 导 入 稳定转染 瞬时性转染 所 有 细胞 适 用性广 但细胞致 死 率高，DNA 和细胞用量大， 需根 据 不同细胞类型 优 化 电 穿 孔 实 验 条 件 病 毒 介 导 法 通过侵 染宿主细胞将 外源基因整合到染色体中 稳定转染 可用于难 转染的细胞、 原代 细胞，体内细胞等 逆 转录 病 毒 特 定宿主细胞 但携 带 基因不能太 大细胞需处 分裂 期 需考 虑 安 全 因素 腺 病 毒 通过侵 染宿主细...
