R N A 的琼脂糖凝胶电泳 默认分类 2010-03-04 22:06:39 阅读26 评论0 字号：大中小 、实验目的 掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定 RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 基本过程同 DNA 电泳一样，但应明确一点的是，因为 RNA 分子对 RNA 酶的作用非常敏感，因此必须用对 RNA 酶有抑制作用 DEPC 水来配置所有溶液，所有与 RNA 接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少 RNA 酶对样品的降解；另外，因为 RNA 分子有二、三级结构可以影响其电泳结果，因此电泳时应在变性剂存在下进行，常用的变性剂为甲醛和戊二醛。 三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总 RNA 溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液，0.5μg/ml 溴化乙锭（EB）10X 载样缓冲液。 四、实验步骤 （1）用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 （2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA 样品4μl 于封口膜上。在实验台上再加入 5μl 1×TAE电泳缓冲液及 1μl 的 10X 载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 （3）打开电源开关，调节电压至 100V，使 RNA 由负极向正极电泳，约 30min后将凝胶放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。 RNA 的变性琼脂糖凝胶检测 试剂： （1）MOPS 缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS）(Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 （2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。 （3）甲醛。 （4）去离子甲酰胺。v 电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2 灌满——室温放置10 分钟——0.1%DEPC 水冲洗。 操作： （1） 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。 （2） 配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g 琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X...
