水解度指标测定

水解度的测定方法一： (茚三酮比色法 ) （1）标准曲线制定：1、20μ g／ml 甘氨酸： 2mg甘氨酸定容到100ml 容量瓶中。2、茚三酮显示剂：水合茚三酮0.5g ，果糖 0.3g ，磷酸氢二钠11.2g ， 磷酸二氢钾 6g, 定容到 100ml. 稍热溶解，避过低温保存1 周。3、40%乙醇标准曲线制作试管0 1 2 3 4 5 6 7 8 待 测样品标液 ml 0.00 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 1.0 0.5 蒸馏水 ml 2.00 1.90 1.80 1.70 1.60 1.50 1.40 1.30 1.00 1.5 茚三酮显示剂 ml 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 摇匀，沸水浴15min，用冷水迅速冷却至室温40%乙醇 ml5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 甘氨酸μg 0 2 4 6 8 10 12 14 20 ?? OD(570nm) N---- 水解液蛋白含量（凯氏定氮）F----- 米糠蛋白换算系数5.95 方法二：采用甲醛滴定法。水解度（ %）=（水解后生成的氨基氮的量/样品中总氮含量）× 100% （1）粗蛋白含量的测定：采用凯氏定氮法。（2）氨基氮的测定氨基酸含有氨基和羧基， 具有两性， 加入甲醛与氨基酸中的氨基作用，可消除其碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，即可对氨基酸进行定量。1、酚酞指示剂： 0.5g 酚酞溶于 100ml 50%的乙醇中2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（36~37%，分析纯） 50ml，加入 0.5%的酚酞指示剂约 3ml，滴加 0.1mol ／L NaOH，使溶液显微粉色，储存于棕色瓶中，临用前配制。具体方法如下 ：分别吸取 2mL 不同水解度的水解液于烧杯中加蒸馏水5mL，向烧杯中加入 5 滴酚酞指示剂，混合后加中性甲醛溶液2.0ml 再混合，用 0.1mol ／L NaOH滴定显微粉色。同时取同浓度但未水解的蛋白液2mL 做空白实验。式中：V—样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；V0—空白耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；N—氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；14.008— 1 mL 浓度为 1.000 mol/L 氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量（mg）。方法三：氮溶指数测定（ TCA-NSI)可 以 通 过 检 测 其 氮 溶 解 指 数 来 初 步 判 定 小 肽 或 寡 肽 含 量 。NSI （ ％ ） ＝ （ N1/ N0 ） * 10 0N0 ＝ 总 氮N1 ＝ 可 溶 性 氮 （ 用 三 氯 乙 酸 ― ― 可 溶 性 氮 测 定 法 ）三 氯 乙 酸 （ TCA） 是 一 种 蛋 白 质 沉 淀 剂 ， 它 可 以 沉 淀 蛋 白 质 和 较 长 的 肽段 。可 以 被 三 ...