细胞毒理学实验技术报告人：MTT法检测细胞活性实验原理1实验材料与方法2实验结果与分析3实验应用4CONTENTS•MTT是一种黄色粉末状化学试剂•商品名为：噻唑蓝•全称为：3-(4，5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3，5-di-phenytetrazoliumromide①实验原理MTT是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下被还原，生成蓝色的甲瓒(formazan)结晶，结晶的生成量仅与活细胞数目成正比。还原生成的结晶可在二甲基亚砜(DMSO)中溶解，利用酶标仪测定490nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。OD值越大细胞活性越强(或药物毒性越小)。因死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原，故成为检测细胞增殖及细胞活性的试剂。②实验材料MTT溶液(PBS溶解，5mg/ml。小剂量分装，4℃避光保存，两周内有效。或-20摄氏度冻存，避免反复冻融)、DMSO需测定的细胞、中高低浓度药物酶标仪、超净台、显微镜培养皿、离心管、96孔板、细胞计数板、移液枪等接种细胞培养细胞呈色比色②实验方法A消化细胞，用细胞计数板计数，调整细胞浓度至104个/ml，接种至96孔板100μl/孔B培养24h后，吸除孔内原培养液，加入培养液配置的不同浓度药物，每孔100μl(空白组不做处理)CD吸除MTT后避光加入DMSO100μl/孔，震荡10min，酶标仪490nm波长测定OD值药物反应完成后，配制MTT(培养液:MTT=5:1)并加入，反应4h③实验结果与分析•将实验数据拷贝至EXCEL并整理•计算细胞存活率(各组值/空白组平均值*100%)•使用GraphPadPrism统计数据并分析实验注意事项MTT有致癌性，使用时注意做好防护措施，最好使用透明一次性乳胶手套MTT对细菌很敏感，需要无菌配制，现用现配DMSO需要避光加入，加入前将孔内液体吸除干净，注意不要把结晶吸除铺细胞一定要均匀，减小实验误差大规模抗肿瘤药物及其适宜浓度的筛选③MTT实验应用检测细胞活性、细胞增殖力和细胞毒性生物活性因子的活性检测、肿瘤放射敏感性测定等体外肿瘤细胞的临床药物敏感性实验THANKYOU!感谢聆听
