《《医学微生物学医学微生物学》》实验五实验五目录末页一、一、抗酸染色法抗酸染色法二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法目录末页目的目的抗酸染色观察结核分枝杆菌的抗酸染色观察结核分枝杆菌的形态。形态。一、一、抗酸染色法抗酸染色法目录末页原理原理分枝杆菌属的细菌细胞壁脂分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，特别是其中大量分枝菌酸质含量较高，特别是其中大量分枝菌酸可影响染料穿入。一旦着色后不易被盐可影响染料穿入。一旦着色后不易被盐酸酒精脱色。酸酒精脱色。一、一、抗酸染色法抗酸染色法目录末页材料材料结核病人的痰液标本、抗酸结核病人的痰液标本、抗酸染色液试剂盒、试管夹、玻片等。染色液试剂盒、试管夹、玻片等。一、一、抗酸染色法抗酸染色法目录末页一、一、抗酸染色法抗酸染色法方法方法1.1.涂片制备涂片制备挑取痰液→在玻片上涂成痰膜（涂挑取痰液→在玻片上涂成痰膜（涂两次，第一次干燥之后再涂第二次）两次，第一次干燥之后再涂第二次）→→干燥→固定。干燥→固定。2.2.抗酸染色抗酸染色初染脱色复染初染脱色复染目录末页一、一、抗酸染色法抗酸染色法方法方法2.2.染色染色⑴⑴初染：石炭酸复红染液（初染：石炭酸复红染液（10min)10min)⑵⑵脱色：酸性酒精（脱色：酸性酒精（1-2min)1-2min)⑶⑶复染：亚甲基蓝复染：亚甲基蓝（（3030秒秒))目录末页一、一、抗酸染色法抗酸染色法结果结果结果观察结果观察::抗酸阳性菌为红色抗酸阴性菌为蓝色目录末页一、一、抗酸染色法抗酸染色法结果结果报告方式（直接涂片法）报告方式（直接涂片法）仔细观察仔细观察300300视野视野((观察时间不少于观察时间不少于4min)4min)，，未发现抗酸杆菌。未发现抗酸杆菌。士：可疑。发现抗酸菌士：可疑。发现抗酸菌ll～～22条／条／300300视野。视野。1+1+：发现抗酸菌：发现抗酸菌33～～99条／条／100100视野。视野。2+2+：发现抗酸菌：发现抗酸菌11～～99条／条／1010视野。视野。3+3+：发现抗酸菌：发现抗酸菌11～～99条／每视野。条／每视野。4+4+：发现抗酸菌≥：发现抗酸菌≥1010条／每视野。条／每视野。目录末页二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法目的目的墨汁负染色法观察新型墨汁负染色法观察新型隐球菌的形态。隐球菌的形态。目录末页原理原理新型隐球菌的荚膜较厚，新型隐球菌的荚膜较厚，一般不易着色，同时菌体折光性较强，一般不易着色，同时菌体折光性较强，用墨汁负染色法可在黑色背景下看到用墨汁负染色法可在黑色背景下看到透亮的菌体。透亮的菌体。二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法目录末页二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法材料材料1.1.菌种新型隐球菌菌种新型隐球菌2.2.试剂优质墨汁试剂优质墨汁3.3.其他载玻片、盖玻片、镊子、普通其他载玻片、盖玻片、镊子、普通光学显微镜光学显微镜目录末页步骤步骤2.2.滴半滴墨汁滴半滴墨汁..取菌并混匀。取菌并混匀。33..盖盖玻片盖盖玻片((覆盖于菌液上，注意先将覆盖于菌液上，注意先将盖玻片一边接触菌液缓缓斜放下，以免盖玻片一边接触菌液缓缓斜放下，以免产生气泡产生气泡))。。44..油镜观察。油镜观察。二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法目录末页二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法结果观察结果观察目录末页二、二、墨汁负染色法墨汁负染色法临床意义临床意义新型隐球菌可引起全身各组新型隐球菌可引起全身各组织器官炎症，最易侵犯的是中枢神经系织器官炎症，最易侵犯的是中枢神经系统，引起慢性脑膜炎。统，引起慢性脑膜炎。墨汁负染色法可鉴别新型隐墨汁负染色法可鉴别新型隐球菌。球菌。
