大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法 感受态细胞(Competent cells) ：常态的细胞不能摄入外部溶液中的 DNA，所以要转化质粒DNA 进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，Ru Cl 等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源 DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 转化：是将异源 DNA 分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域的基本实验技术。 进入细胞的 DNA 分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制－修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。 α -互补现象：因为许多载体都带有一个LacZ基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息，编码α -互补肽，该肽段能与宿主编码的缺陷型β -半乳糖苷酶实现基因内互补（α -互补）。当这种载体转入可编码?－半乳糖苷酶 C 端部分序列的宿主细胞中时，在异丙基-β -D 硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下，宿主可同时合成这两种肽段，虽然它们各自都没有酶活性，但它们可以融为一体形成具有酶活性的蛋白质。所以称这种现象为α -互补现象。由互补产生的α -半乳糖苷酶(LacZ)能够作用于生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β -D-半乳糖苷(X-gal)而产生蓝色的菌落，所以利用这个特点，在载体的该基因编码序列之间人工放入一个多克隆位点，当插入一个外源 DNA 片段时，会造成 LacZ(α )基因的失活，破坏α -互补作用，就不能产生具有活性的酶。所以，有重组质粒的菌落为白色，而没有重组质粒的菌落为蓝色。 方法一：TSS 方法制备感受态细菌（又称一步法） 一、准备工作 1、缓冲液 1×TSS 的配制 事先配制 1M 的氯化镁：20.3g 氯化镁(6 分子水结晶)，定容于100ml 去离子水后封装，不用灭菌。 取干净的 100ml 量筒和 100ml 烧杯，用量筒量取 100ml 去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350)，5ml DMSO，5ml 的 1 M 氯化镁，溶解后用盐酸或者氢氧化钠调整 pH 为 6.5，混匀后用 0.22u m 滤器过滤除菌。储存在4 度，保质期约 6 个月。 2、已划平板（或者用枪头沾取并稀释后涂布）并在培养箱中过夜培养的菌种—Dh5α ，用于接种并振荡培养。两个锥形瓶，分别装有30 ml 和50ml LB，灭...
