大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒的转化 一、目的 1
了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法
掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理
二、原理 （一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理 所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源 DNA 而不将其降解的生理状态
感受态形成后，细胞生理状态会发生改变，出现各种蛋白质和酶，负责供体 DNA 的结合和加工等
细胞表面正电荷增加，通透性增加，形成能接受外来的DNA 分子的受体位点等
本实验为了把外源 DNA（重组质粒）引入大肠杆菌，就必须先制备能吸收外来 DNA 分子 的感受态细胞
在细菌中，能发生感受态细胞是占极少数
而且，细菌的感受态是在短暂时间内发生
目前对感受态细胞能接受外来 DNA 分子的本质看法不一
主要有两种假说： 1、局部原生质体化假说――细胞表面的细胞壁结构发生变化，即局部失去细胞壁或局部溶解细胞壁，使 DNA 分子能通过质膜进细胞
证据有： （1）发芽的芽孢杆菌容易转化； （2）大肠杆菌的原生质体不能被噬菌体感染，却能受噬菌体DNA 转化； （3）适量的溶菌酶能提高转化率
2、酶受体假说――感受态细胞的表面形成一种能接受DNA 的酶 位点，使 DNA 分子能进入细胞
证据是：（1）蛋白质合成的抑制剂如氯霉素，可以抑制转化作用； （2）细胞分裂过程中，一直有局部原生质化，但感受态只在生长对数期的中早期出现； （3）分离到感受态因子，能使非感受态细胞转变为感受细胞
目前对感受态细胞的转化理论尚未有统一结论，但是许多实验室一直进行探索，试图从实验中获得明确回答
有人根据 pBR322 质粒 DNA 对 E・coli K――12X1776 菌株的转化结果，认为
