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生物选修 3 易考知识点背诵专题 1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA重组和转基因技术，赋予生物以 新的遗传特性 ，创造出 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA分子水平 上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术 。（一）基因工程的基本工具1. “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种 特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定 部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专一 性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端 和平末端 。2. “分子缝合针”—— DNA连接酶（1）两种 DNA连接酶（ E· coliDNA 连接酶和 T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合 磷酸二酯 键。②区别：E· coliDNA 连接酶来源于 大肠杆菌 ，只能将双链 DNA片段互补的 黏性末端 之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于 T4 噬菌体 ，能缝合 两种末端 ，但连接平末端的之间的效率较低。（2）与 DNA聚合酶作用的异同 :DNA聚合酶只能将 单个核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶是连接 两个 DNA片段 的末端，形成磷酸二酯键。3. “分子运输车”—— 载体（1）载体具备的条件：① 能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入 。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 。（2）最常用的载体是 质粒 , 它是一种 裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子 。（3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒( 二) 基因工程的基本操作程序第一步： 目的基因的获取1. 目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2. 原核基因采取 直接分离 获得，真核基因是 人工合成 。人工合成目的基因的常用方法有反转录法 _和化学合成法 _。3.PCR技术扩增目的基因（1）原理： DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链 ；第二步：冷却到 55～60℃， 引物结合到互补 DNA链；第三步：加热至 70～75℃， 热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步： 基因表达载体的构建1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在 ，并且可以 遗传至下一代 ，使目的基因能够表达和发挥作用 。2. ...