一株冠耳霉发酵液中活性成分的分离纯化摘 要昆虫病原真菌因为其特殊的生长环境，使其具有独特的代谢途径和生理能力产生出一些与其他陆生微生物中不常见的代谢物。其不仅是非常重要的生物防治材料，也是新颖骨架结构天然产物的理想资源。近十年，昆虫病原真菌来源的天然产物受到极大的关注，被研究者认为是极具潜力的药物开发资源。已有的研究证实了其代谢产物通常具有生防活性和重要的药用活性，如抗植物病虫害、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等等，也是新型药物的重要来源。虽然有关其代谢物的研究越来越多，但是昆虫病原真菌中仍有 90%以上的菌株未有具体的成分研究。接合菌亚门真菌代谢物的研究更是鲜有，由此可见，在接合菌亚门真菌中发掘新天然产物有巨大潜力。冠耳霉 Conidiobolus coronatus (Cost.) Batko 属于接合菌亚门虫霉目新月霉科耳霉属，在世界范围内分布广泛。其主要腐生于土壤中，许多昆虫也是其宿主，可以分解枯枝落叶，是自然界中的重要的分解者，它对生态系统的物质循环有着重要的作用。冠耳霉在虫霉目乃至菌物的系统学中都占有重要地位，具有重要的科研价值。本试验采用多种色谱整合技术和光谱分析方法从不同产地的 18 株冠耳霉及 2 株耳霉中筛选出种子菌株，通过发酵培养从该菌株的发酵液中分离出三个化合物。根据各种光谱技术对单体化合物进行结构鉴定，并对其生物活性做出评价。 该研究为目标菌种资源的快速筛选、菌株的发酵条件的快速优化提供了较好的参考。有助于了解冠耳霉小分子代谢产物在真菌感染过程中的潜在作用，开发其代谢产物的生防潜力，为开发更有效、更环保和更安全的防治害虫的方法提供依据。本试验的研究内容及结果如下：第一，在 HPLC-TOF/MS 分析的基础上采用代谢组学方法识别不同地区的20 株冠耳霉代谢产物的差异，用 PCA 可视化分析，找出具有优势代谢菌株，根据代谢物特点和 HPLC-TOF/MS 详细分析找出种子菌株及目标化合物。第二，通过 SDB 摇瓶大量发酵培养，经乙酸乙酯萃取、过滤、浓缩和复溶等程序，获得最初的粗提物，使微量目标化合物富集，然后经高效制备液相，高效液相分离纯化得到三个小分子化合物，其结构通过 EI-MS，UV，1H NMR，13 C NMR 光谱数据和 X-单晶衍射分析确定，证明为 F2-1 为环二肽（CGP）、F3-1 为 F3-2 为 L-Phenylalanine 。第三，评价所有化合物的生物活性，包括抗菌，及代谢物的生防作用。结果发现它们不具有抗菌活性，但是化...
