糖类测定方法大全( 一 )测 定 方 法 概 述(二)可溶性糖类的提取和澄清1、提取液制备(1)常用提取剂 ——水、乙醇(2)提取液中含糖量控制0
5mg/mL (3)含脂肪食品先脱脂,然后用水提取(4)含淀粉及糊精食品(乙醇沉淀淀粉等)用70~75%乙醇溶液提取(5)含乙醇及 CO2液态食品,蒸发至 1/3 ~1/4 原体积,以除去 C2H5OH及 CO2 (6)酸性食品应先中和防止低聚糖部分水解(7) 提取固体样品有时需要加热,以提高提取效果
一般在40~50℃,防止多糖溶出(8) 乙醇作提取剂加热时应安装回流装置2、提取液的澄清(1)影响测定的杂质色素、蛋白质、果胶、可溶性淀粉、有机酸、氨基酸、单宁,可影响颜色、浑浊、过滤困难
(2)澄清剂① 醋酸铅(中性) Pb(CH3COO)2·3H2O,形成沉淀,吸附杂质,可除去蛋白质、果胶、有机酸、单宁等
② 乙酸锌和亚铁氰化钾二者生成氰亚铁酸锌↓吸附蛋白质等干扰物
③ 硫酸铜和氢氧化钠Cu离子使蛋白质沉淀
(3)澄清剂用量用量适宜,以无新沉淀为准,如2ml 饱和醋酸铅( 30%)、(4)除铅剂由于铅影响还原糖的测定,生成铅糖化合物
常用除铅剂有草酸钠、硫酸钠、磷酸氢二钠
(三)蓝 —爱农( Lane-Eynon)法测定还原糖(国际上常用的定量糖的方法)1、原理斐林试剂甲液( CuSO4·5H2O)斐林试剂乙液(酒石酸钾钠+NaOH)甲、乙混合 →酒石酸钾钠合铜酒石酸钾钠合铜 +葡萄糖→葡萄糖酸+ Cu2O↓(红棕)终点的确定:葡萄糖 +亚甲基蓝(氧化态) →亚甲基蓝(还原态)过量兰色无色(兰色消失)终点时的颜色为:兰色消失了的红棕色2、测定① 预测准确吸取斐林试剂甲液5
00mL、乙液 5
00mL→锥形瓶中, △至沸腾,再加入亚甲基蓝指示剂,在加热的条件下,用样液滴至蓝色褪尽
(先快后慢,要求很快达到终点, 因为亚