试验一植物DNA的提取与纯化

百度文库- 让每个人平等地提升自我11 实验一植物 DNA 的提取与纯化一、实验目的：掌握植物 DNA 的提取与纯化的原理和一般步骤。二、实验原理：植物 DNA 的分离是分子生物学、遗传学和育种学等植物科学研究的基础要求。对DNA 提取一般有三个要求：1. DNA 的纯度可以满足下游操作的要求；2. DNA 必须完整；3. DNA 应当有足够的量。一般来说 ,构建基因组文库, 初始 DNA 长度必须在100kb 以上 ,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和 PCR分析 , DNA 长度可短至50kb，在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段（20kb 以下），并可保证包含PCR所扩增的片段 （一般 2kb 以下）。天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。 要从细胞中提取DNA 时，先把 DNP 抽提出来，再把蛋白质和糖去除，同时除去RNA 及无机离子等，从中分离 DNA 。提取植物 DNA 的方法主要采用SDS和 CTAB法，对它们进行稍加修改就可以应用于DNA 的微量提取。两种方法均采用去污剂裂解细胞并保护DNA 不受内源核酸内切酶降解。本实验采用SDS法提取 DNA。SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中 DNA 与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。 细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制 DNA 酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA 溶液经乙醇沉淀。三、实验材料和试剂：1.实验材料：新鲜植物组织（小麦嫩叶）。2.器材：研钵和研棒、水浴锅、离心机、移液器及枪头、离心管。3.药品试剂：提取液、无水乙醇、70%乙醇、 TE缓冲液、氯仿 :戊醇（ 24:1）。四、实验步骤：1.取新鲜叶片约3g, 剪碎 , 加入液氮充分研磨后转移至2ml 离心管中；2.在 65℃预热的提取液中按L加入 Na Bisufite ， 充分混匀；3.在管中加入适量提取液，60℃水浴保温约30min，不时颠倒混匀；4.冷却至室温后加入等体积氯仿/ 异戊醇，用力摇匀后，放置摇床上摇动15min 左右；5.室温下 10000rpm 离心 15min，小心吸上清于新的离心管中，加入两倍体积的冷酒精，-20 ℃放置 1h；6.挑出 DNA 置于新的管中。加入适量70%酒精，摇动洗涤10min，重复洗涤2-3 次；7.吹干 DNA，加入适量TE在 65℃溶解， 4℃或 -20℃贮存。五、实验结果：如下图所示，所提DNA 的琼脂糖凝胶电泳结果如...