实验一多克隆抗体制实验一多克隆抗体制备备微生物与免疫教研室微生物与免疫教研室周芳美周芳美一、实验目的一、实验目的掌握多抗制备的原理和过程掌握多抗制备的原理和过程熟悉常用的佐剂熟悉常用的佐剂掌握福氏完全佐剂的作用机理和制备方法掌握福氏完全佐剂的作用机理和制备方法掌握研磨法和注射器法制备免疫乳剂，掌握掌握研磨法和注射器法制备免疫乳剂，掌握制备成功的判别标准制备成功的判别标准掌握动物的免疫方法掌握动物的免疫方法二、实验原理二、实验原理抗体：抗体：介导体液免疫的重要效应分子，是介导体液免疫的重要效应分子，是BB细胞接受抗原激活后增殖分化为浆细胞所合细胞接受抗原激活后增殖分化为浆细胞所合成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。单克隆抗体单克隆抗体：：抗原通常是由多个抗原决定簇抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇激活具有相应抗组成的，由一种抗原决定簇激活具有相应抗原受体的原受体的BB细胞产生的针对这一抗原决定簇细胞产生的针对这一抗原决定簇的抗体，称为的抗体，称为······天然抗原分子中常含有多种不同抗天然抗原分子中常含有多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个激机体免疫系统，体内多个BB细胞克隆细胞克隆被激活，产生的抗体中含有针对多种不被激活，产生的抗体中含有针对多种不同抗原表位的免疫球蛋白，称为多克隆同抗原表位的免疫球蛋白，称为多克隆抗体。抗体。多克隆抗体多克隆抗体多克隆抗体制备的意义多克隆抗体制备的意义免疫血清：免疫血清：将抗原注入机体所产生的抗体将抗原注入机体所产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，含有是针对多种抗原决定簇的混合抗体，含有这种特异性抗体的血清。这种特异性抗体的血清。免疫血清作用：免疫血清作用：对传染病的诊断、预防和对传染病的诊断、预防和治疗有重要意义，而且对器官移植，肿瘤治疗有重要意义，而且对器官移植，肿瘤以及某些科研工作也有重要意义。以及某些科研工作也有重要意义。多克隆抗体优缺点：多克隆抗体优缺点：优点优点：：作用全面，具有中和抗原，免疫作用全面，具有中和抗原，免疫调理，介导补体介导的细胞毒作用，调理，介导补体介导的细胞毒作用，ADCCADCC等作用，来源广泛，制备容易等作用，来源广泛，制备容易。。缺点缺点：：特异性不高，易发生交叉反应，特异性不高，易发生交叉反应，从而应用受限。从而应用受限。三、实验试剂与材料三、实验试剂与材料动物：健康家兔动物：健康家兔抗原：生化大实验中制备的抗原：生化大实验中制备的LDLLDL佐剂：弗氏佐剂佐剂：弗氏佐剂注射器、研钵等注射器、研钵等动物的选择动物的选择动物的选择常根据动物的选择常根据抗体的用途抗体的用途和和量量来决定，也与来决定，也与抗原的性质有关抗原的性质有关如要获得大剂量的抗体，则采用大动物；如要获得大剂量的抗体，则采用大动物；如要获得直接标记诊断用的抗体，则直接采用本如要获得直接标记诊断用的抗体，则直接采用本动物；动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体动物制备抗体动物的选择动物的选择如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备则可以采用纯系小鼠制备免疫用的动物最好选择免疫用的动物最好选择适龄适龄的的健康雄性健康雄性动动物，免疫时应同时选用数只动物进行免疫物，免疫时应同时选用数只动物进行免疫一般实验室采用的抗体，多用兔子和羊；一般实验室采用的抗体，多用兔子和羊；抗原抗原就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等原、多糖类抗原和核酸抗原等..根据物理性状可分为根据物理性状可分为颗粒型抗原颗粒型抗原和和可溶性抗可溶性抗原原。。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原...
