放射免疫技术概述VIP免费

人民卫生出版社免疫学检验人民卫生出版社第十九章放射免疫技术人民卫生出版社1.放射免疫技术的基本概念及类型2.放射标记物的鉴定与纯化。3.RIA和IRMA的测定原理及关键技术。4.RIA和IRMA的临床应用与评价本章要点本章要点人民卫生出版社目录放射性核素和放射性标记物的制备1放射免疫分析性2免疫放射分析3人民卫生出版社•放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。•其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。•具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。•放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。前言人民卫生出版社第一节放射性核素和放射性标记物的制备•放射性核素作为放射性免疫技术的标记物，选择何种放射性核素以及如何制备放射标记物（将放射性核素与抗原或抗体连接），是建立放射免疫技术的基础。人民卫生出版社一、放射性核素的基本知识•基本概念指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。•基本类型依据其衰变方式α衰变、β衰变、γ衰变最常用的放射性核素是125I最常用的放射性核素是125I人民卫生出版社125I的优点•化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得高比活性的标记物；•在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高；•半衰期适中（60天左右），且废弃物较容易处理。125I的缺点•用125I取代H，可能使原物质免疫活性受到影响；•易因发生辐射损伤而使标记抗原变性；•作为商品化试剂的产品货架期较短。人民卫生出版社放射性核素放射活性的检测放射性核素放射活性的检测利用射线照射闪烁体（NaI晶体），导致晶体分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换成光电子并放大107倍；从光电倍增管输出的电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处理，并在定标器上显示。利用射线照射闪烁体（NaI晶体），导致晶体分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换成光电子并放大107倍；从光电倍增管输出的电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处理，并在定标器上显示。人民卫生出版社二、放射性核素标记抗原抗体方法主要包括主要包括间接标记法间接标记法直接标记法（氯胺T法）直接标记法（氯胺T法）人民卫生出版社125I-125I或125I+125I-标记物（混合物）Ch-T、LPO氧化取代反应（一）直接标记法——氯胺T法（Ch-T）氯胺T将125I的I－氧化为I+，I+取代蛋白质酪氨酸苯环的氢，形成稳定的放射标记物（二碘酪氨酸），最后加入偏重亚硫酸钠（还原剂）终止反应。氯胺T将125I的I－氧化为I+，I+取代蛋白质酪氨酸苯环的氢，形成稳定的放射标记物（二碘酪氨酸），最后加入偏重亚硫酸钠（还原剂）终止反应。人民卫生出版社使用无还原剂的高比放射性碘源被标记物用量要少Ch-T用量要低控制总反应体积<200μl反应时间1分钟~2分钟弱碱性反应条件人民卫生出版社（二）间接标记法预先将125I用Ch-T法标记琥珀酰胺酯，制成的125I化脂功能基团可与蛋白分子上的氨基酸残基反应，从而使待标记物被碘化。人民卫生出版社三、放射标记物的纯化与鉴定（一）放射标记物的纯化因游离的125I与125I标记抗原（抗体）分子的大小相差悬殊，故采用凝胶层析即可进行分离纯化聚合、损伤物标记蛋白游离125I人民卫生出版社比放射活性高比放射性高纯度完整免疫活性放射化学纯度单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率应大于95%免疫活性标记物与抗体结合的能力标记物与过量抗体反应百分比该值越大,标记物免疫活性好（二）放射标记物的鉴定人民卫生出版社计算法自身置换法比放射活性单位化学量标记物中所含的放射性强度单位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性过高，将影响标记物免疫活性人民卫生出版社比放射性－计算法结果欠准，计算简便依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率）来计算...