医大一院检验科分离免疫细胞的样本来源富含免疫细胞部位外周血-主要的人来源免疫细胞脾脏淋巴结胸腺骨髓分离免疫细胞的目的检测免疫细胞的数量和功能，观察机体免疫状态与免疫细胞相关的病毒等检测（免疫细胞为介质）免疫细胞的细胞生物学研究免疫细胞的培养和建株细胞分离基本原理物理学和生物学特征密度大小表面标志其它活性：吞噬、黏附等不同细胞密度不同1.0931.0921.075-1.090一、外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。Ficoll：聚蔗糖－泛影葡胺分层液法单次密度梯度分离法分离人外周血单个核细胞用1.077±0.001的密度分离液Ficoll法分离液置离心管底全血（肝素或EDTA抗凝）以Hanks液或PBS液1:1稀释轻放在分离液上面，勿混，形成清晰界面水平离心（离心机升降速有要求）室温进行所有操作！方法评价-Ficoll法是分离PBMC最常用的方法操作简单，不需特殊仪器设备分离纯度高，可达95％细胞得率高，可达80％分离介质的要求对细胞无毒基本等渗不溶于血浆等分离物质有要求的比重二、淋巴细胞分离-去单核细胞贴壁粘附法：单核细胞贴壁生长（B细胞损失）吸附柱过滤法：黏附能力Mф、Mon＞DC＞BC＞TC=RBCPercoll分离液法：连续密度梯度离心，不同密度细胞悬浮于不同的密度区三、T、B细胞和T细胞亚群的分离磁性微球分离法：成本相对较低，耗时长流式细胞仪分离法：成本高，细胞量大磁性微球分离法将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠（Immunomagneticbead，IMB）加入细胞悬液，IMB上的Ab与细胞表面的Ag反应，形成抗体/抗原的复合物外加磁场，分选出结合有免疫细胞的IMB纯度和得率：取决于磁珠所连接单克隆抗体的特异性和磁珠大小磁珠大小可以选择太小：细胞得率不高太大：影响细胞活性免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠细胞分选装置特点:简便,快速,费用低,无需特殊设备全自动细胞分选系统流式细胞仪分离法流式细胞分析仪淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiation，CD）。细胞表面分化抗原（CD抗原）适用于T、B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）T细胞表面标志及其亚群CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（regulatoryTcell,TrorTreg）辅助性T细胞Th1细胞CD3+CD4+CD30-Th2细胞CD3+CD4+CD30+分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β，辅助细胞免疫分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，辅助体液免疫参与迟发型超敏反应参与速发型超敏反应具有明显的细胞毒作用没有明显的细胞毒作用细胞毒性T细胞TC1:CD3+CD8+CD30-TC2:CD3+CD8+CD30+调节性T细胞自然存在的调节性T细胞CD4+CD25+Foxp3+诱导产生的调节性T细胞（Tr1和Th3）B细胞表面标志mIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，小鼠红细胞受体是B细胞的重要表面标志，其中以mIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。特点B1(CD19+CD5+)B2(CD19+CD5-）发生时间早晚分布（成年）腹腔、胸腔周围免疫器官针对抗原多糖抗原蛋白质抗原抗体产生细菌抗原及自身抗原广谱抗原抗体种类IgM》IgGIgG》IgM更新情况自我更新不断新生（骨髓）NK细胞表面标志人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD16+CD56+淋巴细胞认定为NK细胞。其他的免疫细胞抗原提呈类细胞表面标志CD14CD1a、CD11c、CD83
