血红蛋白的提取和分离体验从复杂体系中提取生物大分子的基本体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解凝胶色谱法、电泳法等分过程和方法，并了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。离生物大分子的基本原理。11、主要概念：、主要概念：①凝胶色谱法②电泳法③缓冲溶液①凝胶色谱法②电泳法③缓冲溶液④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。22、主要原理：、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理②电①凝胶色谱法分离蛋白质的原理②电泳法分离样品的原理③缓冲溶液的组成和作用机理泳法分离样品的原理③缓冲溶液的组成和作用机理33、课题重点：、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法凝胶色谱法的原理和方法44、课题难点：、课题难点：①样品的预处理②色谱柱填料的处理①样品的预处理②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。和色谱柱的装填。学习目标学习目标一、一、凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）根据被分离物质的蛋白质相对分子根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，质量的大小，利用具有网状结构的利用具有网状结构的凝胶凝胶的分子筛作用，来进行分离。的分子筛作用，来进行分离。大多数凝胶是由大多数凝胶是由多糖类化合物多糖类化合物（如（如葡聚糖或琼脂糖）构成的葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体多孔小球体，，内部有许多贯穿的通道。内部有许多贯穿的通道。⑴⑴..概念：概念：⑵⑵..凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程⑶⑶..凝胶色谱法的原理—分子筛效应：凝胶色谱法的原理—分子筛效应：当相对分子量不同的蛋白质通过凝当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白质无度较慢；而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。分离。▲▲依据的特性是：蛋白质分子量的大小。依据的特性是：蛋白质分子量的大小。凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示二、缓冲溶液二、缓冲溶液1.1.概念概念::在一定的范围内，凡是能够在一定的范围内，凡是能够抵制外加抵制外加少量强酸或强碱少量强酸或强碱的影响使原来溶液的影响使原来溶液pHpH值基本保持值基本保持不变的混合溶液。不变的混合溶液。2.2.缓冲溶液的组成举例：缓冲溶液的组成举例：HH22COCO33——NaHCO——NaHCO33、、CHCH33COOH——CHCOOH——CH33COONaCOONaNaHNaH22POPO44——Na——Na22HPOHPO44、、KHKH22POPO44——K——K22HPOHPO443.3.缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制在电场的作用下，这些带电分子会向着与在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。其所带电荷相反的电极移动。琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图⑴⑴..概念：概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。三、电泳：三、电泳：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳⑵⑵..电泳原理：电泳原理：电泳利用了待分离样品中各种电泳利用了待分离样品中各种分子带电性分子带电性质的差异质的差异以及以及分子本身的大小分子本身的大小，，形状的不同形状的不同，，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。品中各种分子的分离。⑶⑶..常见电泳类型：常见电泳类型：①①琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳②②聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳③③SDS——SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳迁移率取决于它所带迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分净电荷的多少以及分子的大小、形状。子的大小、形状。电泳迁移率电泳迁移率完全取决于完全取决于分子的大小。分子的大小。课...
