生物选修三整理

生 物 选 修 三·现 代 生 物 科 技 专 题 【专题一·基因工程（DNA 重组技术）】 （一）基因工程的基本工具．．．．．．．．．．．． 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （2）功能：识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和 T4-DNA 连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA 连接酶源于 T4 噬菌体，只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同:聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。③具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是：质粒 裸露 结构 简 单 独 立 于细菌染 色 体之外 具有自 我 复制能力 双链环 状 DNA分子。 （3）其 它 载体： 噬菌体的衍 生物 、 动 植 物 病 毒 (．二．)．基因工程的基本操 作程序．．．．．．．．．．． 第 一步 ：目 的基因（编 码 蛋 白 质的结构 基因）的获 取 1、 原 核基因采 取 直 接分离 获 得 ，真 核基因是人 工合成。人 工合成目 的基因的常用方 法 有反 转 录 法 _和化学 合成法 _。 3.PCR 技术扩 增 目 的基因 （1）原 理 ：DNA 双链复制 （2）过 程：第 一步 ：加热 至90～ 95℃ DNA 解 链；第 二步 ：冷 却 到 55～ 60℃ ，引 物 结合到互补 DNA 链；第三 步 ：加热 至70～ 75℃ ，热 稳定 DNA 聚合酶从 引 物 起始 互补链的合成。 第 二步 ：基因表 达 载体的构 建 1.目 的：使目 的基因在受体细胞中稳定存在，并且 可 以 遗 传 至下 一代 ，使目 的基因能够 表 达 和发 挥 作用。 2.组成：目 的基因＋ 启 动 子＋ 终 止 子＋ 标记基因 （1）启 动 子：有特...