第一讲细胞因子与细胞粘附因子的测定任春锋第一节生物学测定方法一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法二、细胞毒活性测定法三、抗病毒活性测定法四、趋化活性测定法五、生物学活性测定方法学评价第二节免疫测定方法一、ELISA方法二、流式细胞分析法三、酶联免疫斑点试验四、免疫学测定方法学评价第三节分子生物学检测方法一、Northern和SouthernBlot二、PCR和RT-PCR三、原位杂交、原位PCR和原位RT-PCR第四节细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用一、临床应用原则二、特定疾病诊断的辅助指标三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。细胞因子细胞粘附因子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间粘附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达和可溶性两种形式存在。细胞因子的主要生物学作用1、抗感染和抗肿瘤2、免疫调节作用3、刺激造血细胞增殖分化4、参与和调节炎症反应5、其它细胞因子以生物学作用进行划分的分类白细胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干扰素（Interferon）——IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趋化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGF1、分泌特点：自分泌、旁分泌、内分泌性2、多源与同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、重叠性（redundancy）6、协同性7、拮抗性8、网络性细胞因子的作用特点自分泌autocrine内分泌endocrine血液循环远距离作用旁分泌paracrine作用于比邻细胞作用于分泌细胞自身细胞因子分泌的方式肥大细胞胸腺细胞BIL-4多效性pleiotropy活化、增殖、分化增殖增殖IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5B细胞IL-4IFN-拮抗性antagonism重叠性redundancy协同性synergy均有刺激B细胞增殖的功能更有效地诱导IgE类别转换IFN-阻断IL-4诱诱类别转化的作用，IL-4抑制IFN-BBB细胞因子检测的方法免疫学检测方法——抗原性检测细胞生物学检测方法——生物活性检测分子生物学检测方法——基因表达检测1、粘蛋白样家族（integrinfamily）2、免疫球蛋白超家族（immunoglobulinsuperfamily,IgSF)3、选择素家族（selectinfamily）4、整合素家族（Integrinfamily）5、钙离子依赖性家族（简称钙粘素Cadherin）6、其它未归类的粘附分子如CD36、CD44、CD45等粘附因子以结构特点进行划分的分类•粘附因子功能及应用：主要功能是调节细胞与细胞、细胞与间质之间的相互作用。病理情况下，由于粘附因子在细胞表面或血循环中的数量和质量有所改变，进而影响原有细胞与细胞、细胞与间质之间的平衡，因此，细胞内外粘附因子的测定对于某些疾病的发生发展机制探讨、辅助诊断、治疗监控及预后方面有重要应用价值。第一节生物学测定方法根据细胞因子特定的生物学活性,应用相应的靶细胞指示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/ml)表示生物活性测定法原理有助于细胞因子检测的活性作用刺激细胞增殖或集落形成的活性维持细胞生长和存活的特性抑制细胞生长或破坏细胞的效应促进细胞趋化或抗病毒作用是最常用的细胞因子生物活性测定方法：以细胞因子依赖性细胞株为靶向，通过观察特定的细胞因子刺激或抑制依赖性细胞株增殖来评估细胞因子的活性水平。一、促进细胞增殖和增殖抑制测定法直接计数法简便、直观,但费时、主观因素影响大、难以标准化和自动化，不适用大量标本检测，因此常用其他间接指示细胞增殖的方法检测细胞代谢活性测定方法3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT等比色法细胞代谢产物测定法代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可溶性分子测定法细胞增殖检测方法分类原理：通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位...
