第七章DNA体外重组与基因转移第七章DNA体外重组与基因转移二、重组DNA分子的转化和扩增（转、增）二、重组DNA分子的转化和扩增（转、增）一、DNA的体外重组（切、接）一、DNA的体外重组（切、接）第八章重组子的筛选与鉴定（检）第九章外源基因的表达切切接接转转增增检检一、DNA的体外重组（切与接）一、DNA的体外重组（切与接）1.同种内切酶生产的粘性末端的连接1.同种内切酶生产的粘性末端的连接2.同尾酶生产的粘性末端的连接2.同尾酶生产的粘性末端的连接3.不同粘性末端的连接3.不同粘性末端的连接5.粘性末端的更换5.粘性末端的更换4.人工粘性末端的连接4.人工粘性末端的连接6.重组率6.重组率1.同种内切酶生产的粘性末端的连接1.同种内切酶生产的粘性末端的连接5'5'GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGEcoRIEcoRI5'GCTTAAAATTCG5'5'GCTTAA5'5'AATTCG5'退火退火GCTTAAAATTCG5'GCTTAA5'AATTCGGCTTAAAATTCG5'GCTTAA5'AATTCGT4-DNAligaseT4-DNAligaseGAATTCCTTAAG5'5'GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAG5'5'GAATTCCTTAAG2.同尾酶生产的粘性末端的连接2.同尾酶生产的粘性末端的连接BamHIBamHI5'5'GGATCCCCTAGGGGATCCCCTAGG5'GCCTAGGATCCG5'5'TACTAG5'5'GATCAT5'退火退火GCCTAGGATCCG5'TACTAG5'GATCATT4-DNAligaseT4-DNAligaseTGATCCACTAGG5'5'GGATCACCTAGT5'TGATCAACTAGT5'BclIBclIGCCTAGGATCCG5'TACTAG5'GATCATTGATCCACTAGG5'5'GGATCACCTAGT3.不同粘性末端的连接3.不同粘性末端的连接BamHIBamHI5'5'GGATCCCCTAGGGGATCCCCTAGG5'GCCTAGGATCCG5'5'CTGCAG5'GACGTC3'T4-DNAligaseT4-DNAligaseCGATCCGCTAGG5'5'GGATCGCCTAGC5'CTGCAGGACGTC5'PstIPstI3'T4-DNApolT4-DNApol切平切平5'CG5'GCKlenowKlenow补平补平5'GGATCCCTAGGATCC5'CTAGGCGATCCGCTAGG5'5'GGATCGCCTAGC4.人工粘性末端的连接（1）5′突出末端4.人工粘性末端的连接（1）5′突出末端5'GCCTAGGATCCG5'5'GCTTAA5'5'5'AATTCGT4-DNAligaseT4-DNAligase5'5'KlenowKlenow补平补平KlenowKlenow补平补平5'GGATCCCTAGGATCC5'CTAGG5'GAATTCTTAA5'5'5'AATTCTTAAGTdTTdTTdTTdTdGTPdGTPdCTPdCTPGAATTGGGGGGCTTAAAATTCGGGGGGTTAAGGGATCCCCCCCCCTAGGATCCCCCCCCCTAGGGAATTGGGGGGGATCCCTTAACCCCCCCTAGGGGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG5'5'GAATTGGGGGGGATCCCTTAACCCCCCCTAGGGGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG退火退火BamHIBamHIBamHIBamHIEcoRIEcoRIBamHIBamHI4.人工粘性末端的连接（2）3′突出末端4.人工粘性末端的连接（2）3′突出末端CTGCA3'GG3'ACGTC5'GCATG3'C5'C3'GTACGT4-DNAligaseT4-DNAligaseTdTTdTTdTTdTdCTPdCTPdGTPdGTPGCATGCCCCCC3'C退火退火PstIPstIPstIPstIC3'CCCCCCGTACGCTGCAGGGGGG3'GG3'GGGGGGACGTC5'5'GCATGCCCCCCGCGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG5'5'GCATGCCCCCCGCGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG5'5'GCATGCCCCCCTGCAGCGTACGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACG5'5'GCATGCCCCCCTGCAGCGTACGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACGKlenowKlenowPstIPstISphISphI4.人工粘性末端的连接（3）平头末端4.人工粘性末端的连接（3）平头末端C3'GG5'G3'C5'C3'GT4-DNAligaseT4-DNAligaseTdTTdTTdTTdTdTTPdTTPdATPdATPGTTTTTTTTTT3'C退火退火C3'TTTTTTTTTTGCAAAAAAAAAA3'GG3'AAAAAAAAAAC5'5'GTTTTTTTTTTGCAAAAAAAAAACCAAAAAAAAAACGTTTTTTTTTTGS1S1C3'5'5'GTTTTTTTTTTGCAAAAAAAAAACCAAAAAAAAAACGTTTTTTTTTTG加热加热GTCATTTTTTTTTGAAAAAAAAACCAGTAAAAAAAAACTTTTTTTTTGTGACCAGT5.粘性末端的更换5.粘性末端的更换BamHIBamHI5'5'GGATCCCCTAGGT4-DNAligaseT4-DNAligaseKlenowKlenow补平补平GATCC5'G5'GCCTAG5'5'5'GGATCCCTAG5'GATCCCTAGG5'5'GGATCGGAATTCCGATCCCCTAGCCTTAAGGCTAGG5'5'EcoRIEcoRIGGAATTCCCCTTAAGGEcoRIlinkerEcoRIlinkerBamHI的位点已被破坏6.重组率6.重组率重组率的定义重组率的定义重组率=含有外源DNA的重组分子数/载体分子总数在常规实验条件下，重组率一般为25-75%重组率是衡量连接反应效率的重要指标，较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作。重组率=含有外源DNA的重组分子数/载体分子总数在常规实验条件下，重...
