2 目录 (一) 介绍 4 (二) 试剂盒物品清单 7 (三) 额外附加物品列表 9 (四) 酵母菌株 11 (五) 酵母载体 14 (六) 方法简述:单杂交文库的构建和筛选 16 方法简述:双杂交文库的构建和筛选 17 (七) 构建用于酵母单杂交的报告质粒载体 18 (八) 构建用于酵母双杂交的DNA-BD 融合载体 19 (九) 构建生成cDNA 文库 21 (十) 构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述) 27 (十一) 酵母单杂交文库的构建和筛选 28 (十二) 酵母双杂交文库的构建和筛选 30 方法A:通过酵母配对(Yeast Mating)来筛选目的蛋白 30 方法B:通过共转化的方法筛选目的蛋白 35 (十三) 分析阳性相互作用结果 38 (十四) 问题解决指南 44 (十五) 参考文献 47 (十六) 相关产品 50 附录A: 双链 cDNA 合成的典型结果 51 附录B: 酵母感受态的制备—LiAc 法 52 附录C: 单杂交对照载体信息 53 附录D: 双杂对照载体信息 54 表格列表 Table I. BD Matchmaker 酵母菌株的基因型 11 Table II. BD Matchmaker 酵母菌株的表型 11 Table III.单杂交系统的载体 14 Table IV. 双杂交系统的载体 15 Table V. 各 BD-Matchmaker DNA-BD 载体的比较 19 Table VI. RNA 起始浓度和PCR 扩增循环数之间的关系 24 Table VII.单杂交共转化的对照实验的设置 29 Table VIII.单杂共转化对照实验:期望的结果 29 Table IX. 双杂交转化的对照实验的设置 33 Table X. 双杂交配对筛选的对照实验的设置 Table XI. 双杂交共转化的对照实验的设置 Table XII. 双杂交共转化的对照实验:期望的结果 Table XIII. 用于PCR 筛选菌落的Assembling Master Mixs 3 图片列表 Figure 1.使用BD Matchmaker 单杂交系统筛选蛋白-DNA 相互作用 4 Figure 2.使用BD Matchmaker 单杂交系统筛选蛋白-蛋白相互作用 4 Figure 3.酵母单杂交和双杂交筛选的大致步骤 5 Figure 4.构建和筛选BD Matchmaker 酵母单杂交和双杂交文库 6 Figure 5.酵母菌株AH109 和Y187 中的报告基因 12 Figure 6.BD Matchmaker 酵母单杂交文库的构建和筛选 16 Figure 7.BD Matchmaker 酵母双杂交文库的构建和筛选 17 Figure 8.用BD SMART 技术合成高质量的ds cDNA 21 Figure 9.BD CHROMA SPIN 纯化柱和收集管 26 Figure ...