Chelex 法提取血液(斑)DNA 原理: Chelex 是由苯乙烯与二乙烯苯的共聚体组成的螯合树脂,其亚氨基二乙酸侧链起着螯合金属离子的作用,防止在其煮沸过程中DNA 的降解,在高温低离子强度下也起着催化DNA 释放的作用
对检材的条件要求 液体血用EDTA 溶液(0
5M EDTA:血=50μl:3ml)或枸橼酸钠溶液(2
5%枸橼酸钠:血=1:4)抗凝,勿用肝素抗凝,须冷藏保存送检
操作步骤: 1、取4μl血液(或3×3mm2血斑样品)放入0
5ml的离心管中,加入0
5ml纯水,振荡混匀,室温浸泡15-30 分钟
2、13,000rpm 离心3 分钟,去除上清液〔上清液可用于做抗人血红蛋白(FOB)金标试剂条检验〕,若是血斑则保留载体
3、加入200μl 5% Chelex-100 溶液,56oC 保温15-30 分钟,振荡5-10 秒
4、沸水中煮8 分钟(或在热循环仪上100oC 保温8 分钟),振荡5-10 秒
5、13,000rpm 离心3 分钟,4oC 保存备用
注意事项: 1、5% Chelex-100 溶液使用前摇匀,用量视检材的量而定
2、液体血用EDTA 溶液(0
5M EDTA:血=50μl:3ml)或枸橼酸钠溶液(2
5%枸橼酸钠:血=1:4)抗凝,冷藏送检
3、液体血涂在滤纸或脱脂纱布上制成血斑时,应在室温下自然晾干,放入纸袋内送检
4、血斑应保留载体,皮革上的血迹最好用纱线转移提取
5、纯水洗一次后,若颜色还很红,可用水再洗一遍
6、微量血斑可不经水洗,直接加入适量5% Chelex-100 溶液保温
7、陈旧血斑可加入蛋白酶K,并适当延长保温时间
Chelex 法提取唾液(斑)DNA 适用范围: 该方法适用于各种载体上的唾液斑,常见的有口腔拭子、烟蒂、邮票、信封折口、 牙刷、果核、饮料罐、水杯、面罩及咬痕等