乳酸菌检测国标方法

5.04.020.01.0m2.05.02.0乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1°C2.2 天平：感量为 O.OIg2.3 无菌吸管：1ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为 90mm2.6 无菌试管：18X180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3 试剂3.1 无菌生理盐水：称取 8.5g 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中，121°C 高压灭菌15min。3.2 MRS(ManRogosaSharpe)培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉酵母粉葡萄糖吐温 80K2HPO4.7H2O醋酸钠.3H20 柠檬酸三铵MnSO4.7H20.2MnSO4.4H20.0515碳酸琼琼脂粉3.2.2 制法：将上述成分加于 1000mL 蒸馏水中，调节 PH 至 6.2±0.2,加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在 121°C 高压灭菌 15-20min。3.3 莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin)和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1莫匹罗星锂盐储备液制备：称取 50mg 莫匹罗星锂盐加入到 50mL 蒸馏水中，用 0.22mm 微孔滤膜过滤除菌。3.3.2半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取 250mg 莫匹罗星锂盐加入到 50mL 蒸馏水中，用 0.22mm 微孔滤膜过滤除菌。3.3.3制法将 A.1.1 成分加入到 950mL 蒸馏水中，加热溶解，调节 pH，分装后 121°C 高压灭菌 15min〜20min。临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至 48°C,用带有 0.22mm 微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为 50mg/mL,半胱氨酸盐酸盐的浓度为 500mg/mL。3.4MC 培养基3.4.1 成分大豆蛋白胨 5.0g牛肉粉 3.0g酵母粉 3.0g葡萄糖 20.0g乳 20.0g10.0g15.0g蒸馏1000mL5.0mL1%中性红溶液3.4.2制法将前面 7 种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节 pH 至 6.0±0.2,加入中性红溶液。分装后 121°C 高压灭菌 15min〜20min。4 检验程序乳酸菌检验程序见图 1。5 操作步骤5.1 样品制备5.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。5.1.2冷冻样品可先使其在 2C〜5C 条件下解冻，时间不超过 18h,也可在温度不超过 45C 的条件解冻，时间不超过 15min。5.1.3固体和半固体食品：以无菌操作称取 25g 样品，置于装有 225mL生理盐水的无菌均质杯内，于 8000r/min〜10000r/min 均质 1min〜2min,闍 1 乳醴菌检验翟序囲制成 1:10 样品匀液；或置于 225mL 生理盐水的无菌...