微生物检验技术考试要点整理-中级

检验技术资格考试考点精要——微生物学检验〔中级〕1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名--VRirus结尾的单词,亚科名--VRirinae 结尾的单词,科名--VRiridae 结尾的单词。目名—VRirales。2004 年 ICTV公布病毒分为：73 个科、11 个亚种、289 个属。2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释法〔以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC 或最低杀菌浓度 MBC〕，两值越低则表示越敏感。MIC 与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC 越小。各药敏纸片间距不少于 24mm，距平板内缘不小于 15mm。药物敏感实验判定标准 ：抑菌圈直径〔毫米〕：20 以上极敏、15~20 高敏、10~14 中敏、10 以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照 NCCLs 的标准或者 CLSI 标准。多黏菌素抑菌圈；在 9 毫米以上为高敏，6—9 毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。4.常用的免疫技术：酶免疫技术〔EIA〕、协同凝集试验、免疫荧光技术〔IF〕、对流免疫电泳〔CIE〕、免疫印迹技术。5.病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR 技术、基因芯片技术。PCR 技术—是选择 DNA 或 RNA 体外扩增技术，用标本提取DNA 为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR 一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃〔作用 1min 氢键断裂形成单链 DNA〕、退火 40-60℃〔迅速冷却30-60s 引物与 DNA 模板结合，形成局部双链〕、延伸70-75℃〔在TaqDNA 聚合酶作用下，以 A、T、G、C 四种脱氧核苷酸为原料，从引物 5’→3’端延伸，合成与模板互补的DNA 链。〕，扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR 特异性的决定因素，PCR 反应中 TaqDNA 聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。变性 DNA 常发生一些理化及生物学性质的改变： 1〕溶液粘度降低。2〕溶液旋光性发生改变。3〕增色效应。热变性 DNA 一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"，Tm 低 25℃左右的温度是复性的最正确条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA 的变性(单链)状态。基因芯片技术〔DNA 芯片、DNA 微阵列〕—主要过程：DNA 微阵列的制备、样品的制备...