大肠杆菌菌体抗原免疫小鼠 实验方案的设计 实验材料 1 . 1 试剂与器材 生理盐水、酒精、碘酊、试管、吸管、三角烧瓶、离心机、剪刀、镊子、注射器、离心管。 1 . 2 无菌器皿的制备 试管、大平皿、三角烧瓶、注射器、吸管、离心管, 经洗液处理后, 用自来水冲洗干净, 再用蒸馏水冲洗3 次, 用纸包好后, 用干烤箱 ( 1 6 0 ℃) 干烤2 小时。 一、制备免疫原 1、细菌的培养：用接种环挑取大肠杆菌，放入肉汤培养基中培养。37℃培养24小时后，用注射器吸取3ml菌液注入300ml肉汤培养基中，37℃振荡培养24小时。 2、比浊：1.175%BaCl2 0.5ml，1%H2SO4 99.5ml，制作比浊液。比浊标准为0.5麦氏比浊。 3、取菌液稀释至上述浊度：菌液细菌浓度为1×10ˆ9/L。 4、灭 活 ：隔 水煮 沸 2到 2.5小时。 5、灭 菌效 果 检 查 ：取适 量 煮 沸 后的肉汤培养液涂 布 在 琼 脂培养基上，37℃培养24小时，看是否有菌落生长。 二、选择免疫动物并进行标记 选择家兔作为实验动物,挑选年龄在 6个月以上当年繁殖的雄性,体重 1-2公斤,健康家兔一只,免疫前用苦味酸涂沫在动物的背部,作出明确的标记，避免混淆。 三、阴性对照标本的留取 1.采血方法 （1）静脉采血法：将家兔放在固定盒内，拔去拟采血部位的毛，用电灯照射加热或用电吹风吹热或用二甲苯棉球擦耳壳，使耳部血管扩张。用粗针头刺破耳缘静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出即可。取血后用棉球压迫止血。亦可用针头插入耳线静脉取血，其操作步骤基本与耳缘静脉注射相似。最好有一助手帮助压紧耳根部，这样采血时比较容易。 （2）颈动脉放血:使动物仰卧固定四肢,颈部剪 毛、消毒后纵向切开前颈部皮肤长约10cm,用止血 钳将皮肤分开夹住,剥离皮下组织,露出肌层,用刀 柄加以分离,即见搏动的颈动脉。小心将颈动脉和迷 走神经剥离长约5cm,选择血管中段,用止血钳夹住 血管壁周围的筋膜。远心端用丝线结扎,近心端用动 脉钳夹住,用酒精棉花球消毒血管周围,用无菌剪刀 剪一 V形缺口。取长2.5cm、直径为 1.6mm塑料管 一段,将一端剪成针头样斜面,并将此端插入颈动脉 中,另一端放入 200ml无菌三角烧瓶内,然后放开止血钳,血即流入三角瓶内,动物流血至死,2.5公斤家兔可放血 80~100ml。 （3）心脏取血:固定动物于仰卧位置,用食指探 明心脏博动量高部位(在胸骨左侧,由下向上数第3 与第4肋骨之间,指兔),剪去少许毛,用 2.5%碘酒 和75%酒精消毒后...
