单克隆抗体制备标准化操作方案 抗体, 单克隆, 方案, 制备, 标准化 第一章: 小鼠免疫 第二章: 滋养细胞的制备 第三章: 细胞融合 第四章: 筛选分泌抗体的杂交瘤细胞 (ELISA法) 第五章: 杂交瘤细胞的亚克隆培养 第六章: 杂交瘤细胞系的冻存与复苏 第七章：腹水制备 第八章：附件 第一章 小鼠免疫 小鼠免疫是单抗制备的关键一环,质控小鼠免疫是制备优质单抗的唯一保证。好的免疫果:血清效价达一万以上，脾脏粘连且大小是正常鼠的两倍以上。 小鼠的选择：选择与所用骨髓瘤细胞同源的Balb/c健康雌性小鼠，鼠龄在 8～12周。为避免小鼠反应不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。 免疫原：免疫原的纯度一般并不重要。但有时免疫原纯度也会造成很大影响，若杂质存在使免疫反应减弱，或筛选方法不能区分对特意性成分反应的抗体及对杂质反应的抗体，以及有些抗原的免疫原性十分强，即便痕迹量的存在，也会影响对所识别抗原的免疫反应。上述诸情况下使用纯化抗原会更有利。 常用的免疫方案： （一） 可溶性抗原 初次免疫： 50～100μ g蛋白抗原加等体积福氏完全佐剂乳化到滴水不化即可做小鼠背部皮下多点注射，注射体积 500μ l/只小鼠，四周后进行第二次免疫 第二次免疫：50～100μ g（25～50ug，为初免剂量一半）蛋白抗原（与初免等量），加等体积福氏不完全佐剂乳化到滴水不化即可做小鼠背部皮下多点注射，注射体积 500μ l/只鼠 两周后采小鼠尾静脉血离心取血清测效价 （用 ELISA方法检测） 效价达一万以上的小鼠融合前三天取抗原 25μ g（50～100ug，与初免剂量相同）加强免疫，尾静脉注射，注射体积 200μ l/只 300ul/只，效价在一万以下的小鼠继续第三次免疫 第三次免疫：50μ g蛋白抗原加等体积福氏不完全佐剂乳化到滴水不化即可做小鼠腹腔注射，注射体积500μ l/只，小鼠融合前三天取抗原25μ g加强免疫，注射体积200μ l/只。 （二） 颗粒性（细胞）抗原 可用5×106~2×107 细胞与完全佐剂混合，作皮下或腹腔注射，2~3周后重复一次，但佐剂改为不完全佐剂，再待 2~3周后用同样剂量细胞或半量细胞静脉注射，3~4天后取脾融合。 为挑选免疫反应较好的动物进行融合，第二次免疫后 10 天左右应从尾部取血，检查抗体滴度。另外，还有脾内注射法和体外培养法。 第二章 饲养细胞的制备 体外培养细胞时，一般单个或极少数分散状态细胞是不能存活的（或生长不良）必需加入一定量的其他...
