电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)_第1页
1/22
变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)_第2页
2/22
变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)_第3页
3/22
实验四 变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE) 一、实验原理 变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)最初是 Lerman 等人于 20 世纪 80 年代初期发明的,起初主要用来检测 DNA 片段中的点突变 (20, 42, 52, 53) 。Muyzer 等人在 1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究 (50) 。后来又发展出其衍生技术,温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis,TGGE) (49) 。此后十年间,该技术被广泛用于微生物分子生态学研究的各个领域,目前已经发展成为研究微生物群落结构的主要分子生物学方法之一 (49, 51)。 1 .原理 双链 DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时,其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的 DNA 片段能够被区分开,但同样长度的 DNA 片段在胶中的迁移行为一样,因此不能被区分。DGGE/TGGE 技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上,加入了变性剂(尿素和甲酰胺)梯度或是温度梯度,从而能够把同样长度但序列不同的 DNA 片段区分开来。 一个特定的 DNA 片段有其特有的序列组成,其序列组成决定了其解链区域(melting domain, MD)和解链行为(melting behavior) (20, 42)。一个几百个碱基对的DNA 片段一般有几个解链区域,每个解链区域有一段连续的碱基对组成(图 1)。当温度逐渐升高(或是变性剂浓度逐渐增加)达到其最低的解链区域温度时,该区域这一段连续的碱基对发生解链。当温度再升高依次达到各其他解链区域温度时,这些区域也依次发生解链。直到温度达到最高的解链区域温度后,最高的解链区域也发生解链,从而双链 DNA 完全解链。(图 1 显示的是一个 234bp 长的 DNA 片段的解链区域,横坐标是该 DNA 片段的序列,依次从第一个碱基到第 234 个碱基;纵坐标是解链温度。该 DNA 片段共有 3 个解链区域。MD1 是解链温度最低的一个解链区域,MD3 是温度最高的一个解链区域。) MD1MD2MD3图1:DNA片段解链区域示意图 不同的双链DNA 片段因为其序列组成不一样,所以其解链区域及各解链区域的解链温度也是不一样的。当它们进行 DGGE/TGGE 时,一开始温度(或变性剂浓度)比较小,不能使双链DNA 片段最低的解链区域解链,此时 DNA 片段的迁移行为和在一般的聚丙烯酰胺凝胶中一样。然而一旦 DNA 片段迁移到一特定位置,其温度(或变性剂浓度)刚好能使双链DNA 片段最低的解链区域解链时,双...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部