精品文档---下载后可任意编辑RNAi 沉默卡氏肺孢子 MSG-UCS 基因表达的讨论的开题报告引言卡氏肺孢子是一种异养真菌，它可以引起卡氏肺孢子病。虽然卡氏肺孢子病已经被发现多年，但是目前治疗手段仍然非常有限。因此，寻找新的治疗方法，尤其是针对其病原菌的治疗方法非常重要。卡氏肺孢子病的病原菌卡氏肺孢子子的致病机制仍不完全清楚。消息传递是真菌生物学中不可或缺的过程，因此，探究消息传递途径在卡氏肺孢子病发病机制中的作用非常重要。以磷酸化事件为中心的信号转导途径是目前最为广泛的消息传递途径之一。磷酸化事件在细胞中发挥着十分重要的作用，这种过程可以通过激酶底物反应进行。报道显示，在卡氏肺孢子子中存在许多的激酶，这些激酶可能是介导卡氏肺孢子子的消息传递途径的重要组成部分。目前在这方面的讨论还非常有限，因此，探究激酶在卡氏肺孢子子中的作用，找出关键的激酶，可能是发现新的治疗方法的关键所在。本讨论将探讨 RNAi 沉默卡氏肺孢子子中 MSG-UCS 基因的表达及其在卡氏肺孢子子的消息传递途径中的作用。MSG-UCS 基因在卡氏肺孢子子中表达较为稳定，对其进行 RNAi 沉默后可以探讨该基因在卡氏肺孢子子的消息传递途径中的功能。讨论问题本讨论的问题在于，RNAi 沉默卡氏肺孢子子中 MSG-UCS 基因的表达是否会影响消息传递途径，从而影响卡氏肺孢子子的生长和发育。讨论内容本讨论拟探讨以下讨论内容：1.构建 RNAi 基因沉默质粒通过克隆技术，构建 RNAi 基因沉默质粒，将 RNAi 中的 siRNA 靶向 MSG-UCS基因，使其在卡氏肺孢子子中表达成为可能。2.卡氏肺孢子子的转染及 RNAi 效果检测采纳转染技术将 RNAi 基因沉默质粒引入卡氏肺孢子子中，并检测其沉默效果，包括 MSG-UCS 基因表达的下降和表型变化等。3.卡氏肺孢子子的生长和发育的讨论通过显微镜、PCR、Western blot 等技术，对 RNAi 沉默卡氏肺孢子子中MSG-UCS 基因表达的变化和卡氏肺孢子子的生长和发育进行讨论，并探讨该基因在卡氏肺孢子子中的作用。讨论方法1.构建 RNAi 基因沉默质粒精品文档---下载后可任意编辑在微生物中，使用 PCR 扩增酶切后的向量 pGP704 和 MSG-UCS 基因的片段，将两种物质复合，并转移到大肠杆菌中进行扩增。2.卡氏肺孢子子的转染及 RNAi 效果检测采纳传统的转染技术将 RNAi 基因沉默质粒引入卡氏肺孢子子中，并利用荧光显微镜和 Western blot 技术检测其沉默效果。3.卡氏肺孢子子的生...
