不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响的开题报告一、选题背景和意义干细胞是具有自我复制和分化潜力的特别细胞，可以分化成多种细胞类型，具有广泛的应用前景。胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是从早期胚胎中分离出来的干细胞，具有较高的分化潜力，可以分化成人体内所有类型的细胞。造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSCs）是一种重要的干细胞类型，可以分化成红细胞、白细胞、血小板等血细胞。近年来，通过 in vitro 诱导人胚胎干细胞分化成造血细胞的努力，为干细胞医学应用提供了新的途径。然而，诱导效率不高、分化过程中出现较多的非特定细胞类型等问题始终限制着该领域的进展。为提高诱导效率，并规避分化过程中的非特定细胞类型的出现，需要深化讨论微环境对细胞分化的调控作用。二、讨论目的通过建立不同的克隆形成微环境，比较不同环境下诱导 ESC 向 HSC 分化的效果，明确微环境对 ESCs 分化成 HSCs 的影响，并为后续讨论提供参考。三、讨论内容1.建立四种不同的克隆形成微环境，包括：（1）单克隆形态：每个孔只放入一个 ESC 克隆（2）混合克隆形态：每个孔放入 3-5 个 ESC 克隆（3）种群一致形态：所有 ESC 克隆均等的混合，再分子培育基中（4）五官神经节轴突引导实验：将 ESC 克隆在体外培育至神经水平，形成五官神经节轴突，用以指导 ESC 向 HSC 分化2.在以上四种克隆形成微环境下，诱导 ESC 向 HSC 分化，并观察 HSC 分化效果。3.比较不同克隆形成微环境下 ESC 向 HSC 分化的效果，分析微环境对 ESC 分化的影响。四、讨论方法与技术路线1.建立四种不同的克隆形成微环境。建立单克隆形态，选取 DS-1 ESCs 克隆，由单个 ESC 克隆进一步分裂并在体外培育。建立混合克隆形态，选取 3-5 个 ESC 克隆，在体外培育至稳定增殖阶段后混合，再分别移至不同的孔中。建立种群一致形态，将不同 ESC 克隆混合后放在分子培育基中，经过 24-48 小时，同种克隆形成单一群体。精品文档---下载后可任意编辑建立五官神经节轴突引导实验，选用仙鹤骨隆起细胞系 GC4 作为神经节轴突引导因子，将 GC4 细胞培育至分泌突触素高峰，将 ESC 载体移植至 GC4 分泌突触素高峰的培育基中，继续培育至神经发生和轴突发出状态。将形成神经轴突的细胞移植至 HEF 培育基中。2.诱导 ESC 向 HSC 分化，并观察分化效果。在四种不同的...