1 安捷伦液相1260 高效液相色谱 操作规程 1.前期工作 查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。 流动相选择注意事项： ① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； ② 所选用的流动相一定要与样品相溶； ③ 各流动相之间可以很好的相溶； 固定相选择注意事项： a. 正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hex ane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methy lene Chloride）等。 b . 反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相 对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙 腈 等的混 合物。样品流出色谱柱的顺 序是极性较强的组分最先被冲洗出，而 极性弱的组分会 在 色谱柱上 有更 强的保留 。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Bu ty l）、C6H5（Pheny l）等。 2 2 .准 备 工 作 ① 用 于 液 相 色 谱 分 析 的 样 品 溶 液 使 用 前 要 经 过 0.15µm 过 滤 器过 滤 ， 必 须 达 到 均 匀 而 无 颗 粒 的 状 态 ； ② 流 动 相 一 定 要 选 用 色 谱 级 别 的 （ 最 好 是 默 克 、 飞 世 尔 、 时 联等 牌 子 的 ）， 并 且 在 使 用 之 前 一 定 要 使 用 0.4µm 过 滤 器 过 滤 ， 再 用 超声 波 清 洗 仪 脱 气 处 理 20-30min； ③ 在 连 接 柱 子 和 色 谱 仪 之 前 ，阀 件 或 管 路 一 定 要 清 洗 干 净 ，（ 一般 用 异 丙 醇 将 管 路 清 洗 ） 3.仪 器 操 作 （ 一 ） 将 所 选 择 的 流 动 相 加 入 相 应 的 试 剂 瓶 中 ： 棕 色 瓶 对 应 A泵 ， 该 瓶 中 只 能 加 双 蒸 水 或 娃 哈 哈 纯 净 水 ； B、 C、 D 泵 根 据 需 要 添加 。 注 ： 若 流 动 相 中 有 水 、 ...
