实验7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳（poly acry lamide gel electrophoresis,简称PAGE），由称盘状电泳。这种电泳是在区带电泳的基础上，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系（即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH 的不连续性及电位梯度的不连续性），使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带（厚度为10-2cm），然后再进行电泳分离。 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性（discontinu ity ），凑巧在垂直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状（discoid shape），取“不连续性”和“圆盘状”的英文字头“disc”。因此英文名称为“disc electrophoresis”，中文直译为盘状电泳。 仪器装置：如图 A 所示，上下两个槽为圆形或方形，其中注入缓冲液（图中曲线表示缓冲液面）。上下槽的缓冲液分别有正负电极通入。下槽外壳在必要时可通入冷水促使降温，水流方向用箭头表示。上槽底部有许多小孔，可插入装有聚丙烯酰胺的玻璃管。 图 A 在圆盘电泳过程中有三种物理效应：①样品的浓缩效应，②凝胶的分子筛效应，③一般电泳分离的电荷效应。由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高。下面就圆盘电泳过程中的三种物理效应的原理加以说明： 1. 样品的浓缩效应：由于电泳基质的4 个不连续性，使样品在电泳开始时，得以浓缩，然后再被分离。（1）凝胶层的不连续性：浓缩胶：为大孔凝胶，有防止对流的作用。 分离胶：为小孔凝胶，也有防止对流的作用。样品在其中进行电泳和分子筛分离。 蛋白质在大孔凝胶中受到的阻力小，移动速度快。进入小孔凝胶时遇到的阻力大， 速度就减慢了。由于凝胶的不连续性，在大孔胶与小孔胶的界面处就会使样品浓缩， 区带变窄。（2）缓冲离子成分的不连续性。(3)电位梯度的不连续性。(4)pH 的不连续 性：在浓缩胶和分离胶之间有 pH 的不连续性，浓缩胶应有的pH 应为8.3，分离胶应 有的pH 为8.9。 2. 分子筛效应：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径的分离胶时，受阻滞的程度不同，因此表现出不同的迁移率，即所谓的分子筛效应。即使净电荷相似，也就是说自由迁移率相等的蛋白质，也会由于分子筛效应在分离胶中被分开。 此处分子筛效应是指样品通过一定孔径的凝胶时，小分子走在前面，大分子走在后面。而在柱层析方法中的分子筛效应，则是大分子通过凝胶颗粒之间的缝隙先流出来...
