实验一大肠杆菌基因组提取

在实验开始，首先对实验的一些必须步骤（注：在几乎每一次小实验都会使用到的试验方法）做一定的解释。避免在写实验报告的过程中太过混乱！并且这些过程并不是每一位同学都参与了的，故在本实验报告的开篇写出。 （一）制备1%的琼脂糖凝胶 称取1g 琼脂糖，放入锥形瓶中，加入100 mL 的1 × TAE 缓冲液，在微波炉中加热。完全融化后，取出摇匀。 （二）胶板的制备 1. 用橡皮膏将胶板的两端边缘封闭好。 2. 将胶板放在水平处，放好样品梳子。 3. 将冷却到60℃左右的琼脂糖凝胶缓慢倒入胶板中，注意不要产生气泡。胶的厚度在3-5mm 之间。 4. 待胶凝固后，取出梳子，取下橡皮膏，放入电泳槽内（注意：梳子的方向靠近负极）。 5. 向电泳槽中加入1 × TAE 缓冲液，缓冲液要浸没凝胶。 （三）加样 1. 在样品中加入适量的10 × 上样缓冲液，使缓冲液的终浓度为 1×。 2. 用微量移液器将已加入缓冲液的样品加入上样孔中。记录加样的顺序和加样量。（注意：加样的过程中不要让样品溢出上样孔） （四）电泳 1. 接通电泳槽与电泳仪的电源（注意 DNA 片段是从负极向正极移动）。DNA的迁移速度与电压成正比。最高电压不超过5V/cm。 2. 当溴酚蓝染料移动到凝胶的2/3 处时，停止电泳。 （五）染色 将电泳后的凝胶浸入溴化乙锭染色液中（带手套操作）。 （六）观察实验结果 在紫外灯（360 nm 或 254 nm ）下观察染色后的凝胶，DNA 处显出橘红色的荧光条带。 实验一 大肠杆菌基因组提取 【实验目的】 1.学习并掌握细菌基因组的提取方法 【实验原理】 DNA是一个环形的大分子DNA,真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内。不同种属的生物，以及不同形式的细胞（如菌类、培养细胞、植物组织，动物组织）基因组提取的方法是不同的，但其基本原则是类似的，即既要将 DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持 DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶 K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使 DNA从溶液中析出。SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶 K的重要特性是能在SDS和 EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与 DN...