生 物 化 学 实 验 预 习报 告 实验二酶活力测定方法的研究(1 ) ——淀粉酶活性的研究 一、研究背景 酶即由活细胞产生的一类有催化活性的生物大分子,大多数由蛋白质组成(少数为RNA),它是细胞赖以生存的基础,细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶的催化具有高效性、专一性、可调节性以及需要温和的条件。酶的催化活性受外界条件的影响,如温度、pH、离子强度、激活剂、抑制剂等均会使酶活性发生改变。另外,酶在工业生产及生活中应用广泛,如酱油、食醋以及酿酒工业都需要酶的参与,洗衣粉加入酶增强去污能力等。酶活性的测定具有较强的实际意义,例如某些酶活性的变化可以引起特定的疾病,测定这些酶的活性可以作为疾病诊断的一个依据。 淀粉酶是水解淀粉糖苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的方式,可以分为 α-淀粉酶与 β-淀粉酶等。休眠的种子中只有 β-淀粉酶存在,而 α-淀粉酶在种子萌发过程中才形成。测定淀粉酶的活性具有重要的意义,淀粉酶普遍存在于植物体内,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,其活性高低可以衡量种子萌发速率,也可以作为水稻抗逆性的生化指标(如干旱、盐、重金属胁迫)。本实验中我们通过学习经典的淀粉酶活力测定方法,分析具体的实验细节,从而获取酶活力测定的相关理念。 二、研究目标 1.掌握酶活力测定的一般思路与方法; 2.进一步熟练使用分光光度法测定物质浓度; 3.测定α-淀粉酶与 β-淀粉酶的活性; 4.体会并掌握实验细节的设计与分析方法。 三、研究策略 两种淀粉酶的特性有所不同,α-淀粉酶不耐酸,在 pH3.6 以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,在 70℃ 15min 钝化。根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。本实验采用加热的方法钝化 β-淀粉酶,测出 α-淀粉酶的活力(原因分析见思考题 6)。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力(α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力),再减去 α-淀粉酶的活力,就可求出 β-淀粉酶的活力。另外,实验时分别设置对照组和测定组,从而排除无关变量的干扰。采用分光光度法测定产物麦芽糖的含量,计算出产物的生成速率,从而表征出淀粉酶的活性。 四、研究方案及可行性分析 1 .研究方案 (1)酶的获取 淀粉酶广泛存在于禾谷类的种子(特别是萌发后的种子)中,所以取萌发的小麦种子研磨浸提得到初始酶液。 (2)反应过程 α-淀粉酶耐高温,而 β-淀粉酶...