实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应

实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应 一、实验目的 掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。 二、实验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。 三、实验仪器 1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、pH 试纸 6、水浴锅 7、移液管 四、实验试剂 1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍，3-4 层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。 2、 0.5%苯酚：1g 苯酚加蒸馏水稀释至 200ml。 3、Millon’s 试剂：40g 汞溶于 60ml 浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。 4、尿素晶体 5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至 100ml 6、10%NaOH：10g NaOH 溶于蒸馏水，稀释至 100ml 7、浓硝酸 8、0.1%茚三酮溶液：0.1g 茚三酮溶于 95%的乙醇并稀释至 100ml. 9、 冰醋酸 10、浓硫酸 11、饱和硫酸铵溶液：100ml 蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 13、95%乙醇。 14、醋酸铅溶液：1g 醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至 100ml 15、氯化钠晶体 16、10%三氯乙酸溶液：10g 三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml 17、饱和苦味酸溶液：100ml 蒸馏水中加苦味酸至饱和。 18、1%醋酸溶液。 五、实验步骤 蛋白质的颜色反应 （一） 米伦（Millon’s）反应 1、苯酚实验：取 0.5%苯酚溶液 1ml 于试管中，加 Millon’s 试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。 2、蛋白质实验：取 2ml 蛋白液，加 Millon’s 试剂 0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。 （二） 双缩脲反应 1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加 10%NaOH 溶液 1ml，摇匀，再加 2-4 滴 1% CuSO4溶液，混匀，观察现象。 2、取蛋白液 1ml，加 10%NaOH 溶液 1ml，摇匀，再加 2-4 滴1% CuSO4 溶...