精品文档---下载后可任意编辑鸭腺病毒 1 型病毒全基因组感染性 BAC 克隆的构建的开题报告1.讨论背景鸭腺病毒 1 型（Duck adenovirus 1，DAV-1）是一种主要侵袭鸭子的病毒，属于腺病毒科（Adenoviridae）亚科（Aviadenovirus）的一种病毒。DAV-1 主要感染家禽类动物，引起禽类颈水肿、急性呼吸道综合征等多种症状，在农业生产中造成巨大经济损失。因此，讨论 DAV-1 的病理机制，寻找有效的治疗方法和预防策略，就显得尤为重要。目前，讨论 DAV-1 的手段主要有传统病毒学方法和分子生物学方法。传统病毒学方法主要包括病毒分离、鉴定及血清学检测等，其缺点是操作时间长、检测过程繁琐、效率低下。而分子生物学方法则能够从基因水平上更深化地讨论病毒的生物学特性和病理机制，包括病毒基因组的序列分析、病毒蛋白质的功能讨论、病毒复制和生长机制的讨论等。因此，在讨论 DAV-1 方面，分子生物学方法被广泛应用。目前，已经有一些 DAV-1 的基因组序列已经被解析，并且通过 PCR扩增方法获得了 DAV-1 的特异性片段。但是，这些方法均存在一些缺点，如 PCR 扩增方法的引物设计难度大、扩增效率难以保证，并且还容易出现偏差和杂交现象等。因此，我们有必要采纳更加先进的方法来讨论DAV-1。2.讨论目的本次讨论的目的是通过利用基因重组技术，构建 DAV-1 全基因组的感染性 BAC 克隆，对 DAV-1 基因组进行讨论。具体目的包括：（1）猎取 DAV-1 的全基因组 DNA 序列，并构建感染性 BAC 载体，达到将 DAV-1 基因组拆分成几个易于讨论的功能模块的目的；（2）比较分析不同株型 DAV-1 的全基因组序列，探讨其分子特征和进化关系；（3）构建不同功能蛋白的表达载体，如包膜蛋白 VP2 的重组表达载体，为进一步讨论 DAV-1 蛋白质结构和生物学功能奠定基础。3.讨论方法（1）猎取 DAV-1 的全基因组序列精品文档---下载后可任意编辑采纳 PCR 法，从 DAV-1 分离株中扩增出全基因组序列，包括它的左右端及 E3 区域，构建 DAV-1 感染性 BAC 克隆。（2）构建重组 BAC 克隆运用纯化和限制酶消化技术，将 PCR 扩增的 DAV-1 基因组 DNA 片段克隆到质粒 pBeloBAC11 上，并经由转化到大肠杆菌 DH10B 中得到重组 BAC 克隆。（3）构建 VP2 重组表达载体利用大肠杆菌表达系统，通过基因克隆技术构建包膜蛋白 VP2 重组表达克隆，并对表达产物进行纯化和二次结构分析。（4）分析 DAV-1 全基因组序列及...
