标准菌株使用标准操作规程 1 检验目的 对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。 2 范围 微生物实验室保存的标准菌株。 3 职责 微生物组工作人员正确执行本操作规程。 4 术语和定义 4.1 标准菌株 其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。 4.2 标准储备菌株 标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。 4.3 工作菌株 标准储备菌株传代后得到的同种菌株。 4.4 标准培养物 标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。 4.5 质控菌株 ATCC 最佳，但当无法获得时可以使用ATCC 演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。 5 保存程序 5.1 标准菌株 5.1.1 商业购买的ATCC 标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以 2 年以上。安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。 5.1.2 复苏 用 1ml 无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养 18-24h。酵母菌要求 3 天，形成孢子的微生物宜保存孢子。 5.2 标准储备菌株 5.2.1 由复苏后的ATCC 标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株，可用 1-2 年。一年 52 周需要 52 支以上。 5.2.2 甘油肉汤保存法 成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于 20%的甘油。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80℃保存。除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限1-5年。 5.2.3 全血保存法 成分为脱纤维羊血。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80℃保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌 氧 菌。保存期限1-5 年。 5.2.4 标准储备菌株进行编号和登记。 5.3 工 作 标准菌株 由标准储备菌株传 代 得 到的菌株。标准储备菌株对 多 向 下 传 三 代 。过 多 的传 种会 增加变 异 的机 会 。标准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养 18-24h 即 工 作 标准菌株。储存在2-8℃，可放 四 周。个 别 营养...
