CRISPR/Cas9 CRISPR/Cas9 ...................................................................................................................................... 1 简介 ................................................................................................................................... 1 原理： ............................................................................................................................... 1 应用： ............................................................................................................................... 4 技术介绍： ....................................................................................................................... 6 技术优缺点： ................................................................................................................... 9 简介 CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中，并利用相应的 CRISPR RNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。 CRISPR-CAS 系统的组成主要包括: 由不连续的重复序列 R( repeat) 与长度相似的间区序列 S( spacers) 间隔排列而成的CRISPR 簇，前导序列 L( leader) 以及一系列 CRISPR 相关蛋白基因 cas。 Cas 蛋白是一种双链 DNA 核酸酶，能在gu ide RNA 引导下对靶位点进行切割。它与 folk 酶功能类似，但是它并不需要形成二聚体才能发挥作用。 原理： 此系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-deriv ed RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA （trans-activ ating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合 物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计这两种 RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA （short gu ide RNA ），足以引导 Cas9 对 DNA 的定点切割。 作为一种 RNA 导向的 dsDNA 结合蛋白，Cas9 效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（u nify ing factor），能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9（ Cas9 nu cle...
