鸡胚法病毒分离培养作业指导书

第 1 页共 8 页作业指导书编号：TYCDCQTD0C0012018病毒分离培养（鸡胚法）版本：第一版第 0 次修改颁布日期：2018—11—121.目的规范本中心分离和鉴定各型流感病毒的操作方法，确保结果准确、可靠和实验室生物安全。2.依据标准《流行性感冒诊断标准》WS285-2008 附录 A＜仅限 A1,A2.1＞，附录 G《全国流感监测技术指南》附件 1＜一、四、五＞3. 适用范围适用于各型流感病毒的分离和鉴定4. 实验室生物安全级别及个人防护对采集自属于感染流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在 BSL-2实验室内进行，并遵循生物安全二级个人防护。在特殊情况下（如新型流感病毒的分离培养工作等），应根据实际情况调整实验室生物安全级别及个人防护级别。5.标本的采集、处理和储存5.1 推荐采集的呼吸道标本种类及拭子的选择发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于 4°C 冰箱,并马上送至实验室。标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。标本采集管应包含 3 毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。5.2 标本处理实验操作人员在处理流感样病例标本时必须在 BSL-2 实验室的生物安全柜中进行。标本在实验室内/间转运时需有双层防护包装。标本在离开生物安全柜前，应使用 75%酒精或新鲜配制的含氯消毒液（有效氯含量 2000mg/L）对容器表面进行消毒。收到标本后，应尽快处理并进行分离，避免反复冻融。按标本类型不同分别处理：鼻、咽拭子标本应将管内拭子在管壁反复挤压后，弃去拭子；鼻腔、气管吸取物标本应用干净灭菌的毛细吸管反复吹打，以便打碎粘液；鼻腔或咽部冲洗液标本应充分振荡标本管，将粘液打碎。咽拭子在进行挤压时，动作要轻柔勿剧烈操作，以防止产生气溶胶和液体溅出。处理前将合适尺寸的纱布在新鲜配制的含氯消毒液（有效氯含量 1000mg/L）中浸泡并拧干，平铺于生物安全柜内操作区。标本经以上处理后置 4C,待其自然沉淀 5〜10 分钟，取上清液直接接种或低温保存。如采样液中未加抗菌素，接种前应补加庆大霉素终浓度为 0.1mg/ml,抗真菌药物终浓度为 2mg/ml。混匀作业指导书编号：TYCDCQTD0C0012018第 2 页共 8 页病毒分离培养（鸡胚法）版本：第一版第 0 次修改颁布日期：2018—11...