流式细胞仪检测技术与质量控制 【摘要】流式细胞术(FCM）检测 HLA 等位基因是最近新建立的方法，与原有的分型技术相比，技术上有很大的改进和突破。流式细胞术已广泛用于临床常规检验中,为保证检验结果的可靠性，提高准确度和室间结果的可比性，流式细胞术质量控制越来越受到重视。它在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选，同传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精密度高、准确性好等特点. 【关键词】流式细胞术;检测技术；质量控制 流式细胞仪检验技术（FCM），即流式细胞术，是以流式细胞仪作为检测手段,以免疫荧光技术作为主要标记方法的一门先进的分析技术。该方法用免疫磁珠作为载体,在同一微孔内进行反应，利用流式细胞仪检测杂交信号和区分探针的种类。本技术使用的免疫磁珠具有一定的特性，磁珠可利用颜色进行标识[1］.当免疫磁珠上两种颜色混合的比例不同时，经流式细胞仪检测后即可区分定义为不同种类的免疫磁珠，目前两种颜色的组合在流式细胞仪上最多可区分成为 100 种不同的免疫磁珠. 1 材料与方法 1。1 标本收集 收集近 3 年本院治疗的 30 例患者,对 30 例患者行流式细胞仪检测，30 例受检者中，男性患者 16 例,女性患者 14 例,最大年龄 60 岁，最小年龄 17 岁，患者平均年龄 39 岁. 2 检测方法 2.1 采纳特定的免疫磁珠作为载体，将已知序列特异性探针（SSO)固定在免疫磁珠上，每一种特异性探针固定在已知颜色比例的免疫磁珠上.由于免疫磁珠上颜色比例的不同,在流式细胞仪红色激光束下可进行区分，根据事先设计的标记情况，通过流式细胞仪检测后可确认特定颜色比例免疫磁珠上携带的特异性探针的种类，从而达到将探针区分的目的。 2。2 利用标记的特异性引物对目的 DNA 进行扩增,将 PCR 扩增产物与免疫磁珠上的序列特异性探针（SSO）在同一孔内进行特异性杂交,再加入荧光显色剂，然后利用流式细胞仪绿色激光束检测杂交信号，红色激光束区分探针的种类，利用软件分析杂交结果得出样本 HLA 基因型别。 3 方法学评价 该方法与 PCR-SSO 有相似的地方，但是技术上有重大的突破。本方法灵敏度非常高，在96 孔微板上可进行大规模的检测，实现了所有探针的杂交于液相条件下在同一个孔内进行,而且采纳免疫磁珠作为载体，具有快速、简便、可靠的优点，平均每个孔在流式细胞仪上检测的时间不到 30s。目前已有商品化的试剂供应，同时该技术也广泛应用于其他方面(如传染病指标等...
