细胞染色方法总结VIP专享

Hoechst 染色：hoechst 可以穿过活细胞膜与细胞核结合 （主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色。 Hoechst 染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。hoechst 有 hoechest33342 和 hoechst33258 两种 hoechsts33258，hoechst33342 二者 区 别 不 大 ， 但 是 hoechst33342 对 细 胞 的 毒 性 作 用 更 小 一 些 ， 所 以 一 般 来 说hoechsts33258 用于细胞固定后再染色，而 hoechst33342 则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI （Propidium Iodide 碘化丙啶)染色： 是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide， PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏 死细胞 由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用 PI 单一染色观测培育细胞,只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡(当然晚期凋亡 PI 亦可着色)。但是假如您只是想知道细胞的死亡情况，而不是认真区分坏死或凋亡，那么 PI单一染色也可以。但是假如您一定要认定细胞的凋亡，那么 PI 单一染色显然不够！annexin—v 染色细胞凋亡早期，细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS）外翻 ,Annexin-V 在 Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin—v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态。Annexin—V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V 用 FITC 标记发绿色荧光；假如用 PE标记就发红色荧光。JC—1 染色 JC-1 是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer）存在，发射光以绿光（～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体（aggregation），发射光以红光(—590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性（polarization),其外膜为负极,内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和 H+流调控.当线粒体状态良好时对 JC—l 摄取量少,因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化（depolarization）时，线粒内 JC—l 的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1 染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期...