抗 HBV 核酶的讨论进展 乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的病原体。在我国 HBV 感觉率达 10%，而传统的抗病毒药物远期疗效均不显着，寻找新型抗HBV 药物成为迫切需要。 核酶是一类具有生物催化功能的 RNA，可定点切割 RNA 靶分子，从而达到有效阻断基因表达的目的[1]。通过合理的设计及操作，核酶可阻断 HBV 的复制及表达。所以在基因治疗领域倍受重视。 1 核酶的类型及设计 到目前为止，人们发现的核酶共有六种类型。即Ⅰ类内含子、RNaseP、锤头状核酶、发夹状核酶、丁型肝炎核酶和 VS 核酶。通过对这六类核酶组成及结构的讨论，人们已经开始利用锤头状、发夹状核酶的特点，人工合成所需要的核酶。Weizsacker、汤华。竺来发等人所设计针对 HBV 的核酶，均采纳这种传统方式。Hselh 等则就 HDV 核酶讨论对乙型肝炎病毒的阻断作用。对于核酶的合成，有两种方法。①是用 DNA/RNA 合成仪直接合成。②先合成核酶的双链或单链模板，然后用T4DNA 连接酶将其整合并克隆至合适的表达载体，让其表达出核酶。这是一种简单、有用的方法。通过对这些核酶的深化讨论，有助于有效控制 HBV 的感染。 2 提高核酶的稳定性 由于血清和细胞内含有大量的核酸酶，体内表达核酶存在被降解的可能。因此目前大多数讨论致力于提高体外合成核酶的稳定性修饰，也有关于体内表达核酶的稳定性的讨论报道。在体外许多讨论针对2’-OH 进行修饰，以增加核酶的稳定性。如 Taylor 设计的 DNA-RNA 杂合核酶，即与底物配部分用脱氧核苷酸替代。结果其体外活性提高 6 倍，稳定性提高 2 倍。Heidenreich 则以 2’-氟替代，发现提高了稳定性但也降低了剪切活性。亦有以2’-甲基，2’-脱氨，2’-氨基，磷硫替代等修饰的报道。 核酶在细胞内提高稳定性则通过装在tRNA 反密码环或在核酶末端引入茎环结构来进行。连建奇在核酶两端设计顺式核酶也是一种有效的方法。 3 提高抗病毒效率的方法 ①体外进化 目前用的核酶，均为人工设计，但即使合理设计的核酶，催化效率也低于天然核酶。根据 RNA 分子进行技术提出进行体外筛选方法，在抗 HIV 中已有报道，对抗 HBV 也是一种可行的方法。②多位点核酶的联合作用，针对靶 RNA 分子的不同位点进行多位点破坏，进一步提高核酶的剪切率，这样既可防止 HBV 的变异引起变异躲避，也可减少空间构型的影响。许多设计都采纳了这种思路，如Weizsacker 所用三个核酶的串联作用。③与定向技术相结合，如用...
