齐鲁医学大肠杆菌的培养

大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培育基的配方：液体培育基牛肉膏 3.0g蛋白胨 10.0g氯化钠 5.0g水 1000mlpH7.4-7.6固体培育基在液体培育基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量 按培育基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。（2）熔化 在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需要的总体积。将称量好的 1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。（3）调 PH 在未调 PH 前，先用精密 PH 试纸测量培育基的原始 PH，假如偏酸，用滴管向培育基中逐滴加入 1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用 PH 试纸测基 PH 直到 PH 达到 7.4-7.6。反之用 1mol/L HCl 进行调节。（4）分装将培育基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过 1/2 加塞 培育基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。（5）包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培育基名称、配制日期。（6）灭菌 将上述培育基以 0.1Mpa,121,15min℃高压蒸气灭菌。（7）倒平板 ，取三个已消毒的培育皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培育基倒制三个平板培育基，冷却。（8）搁置斜面 将灭菌的试管培育基冷却至 50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。2 接种大肠杆菌斜面种子(1) 取实验室储备的大肠杆菌 BL21 种子， 在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。(2) 将接种好的斜面放入 37℃的恒温培育箱子中培育 24h。3 制备平板种子 (1)在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为 1 倍，10 倍，100 倍和 1000 倍，用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul)，然后在 37℃培育箱中过夜。（12）次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新奇灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培育基中 37℃，170r/min 恒温振荡培育 18h 作种子培育液。其后的实验中，每次实验前从种子培育液中吸取 2ml 菌液接种于新奇灭菌的液体培育基中，37℃，170r/min 恒温振荡培育使用牛肉膏蛋白胨培育基 组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl5g...