大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培育基的配方:液体培育基牛肉膏 3.0g蛋白胨 10.0g氯化钠 5.0g水 1000mlpH7.4-7.6固体培育基在液体培育基的基础上再加入 1.5%-2.0%的琼脂1 试管斜面与平板的制备(1)称量 按培育基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。(2)熔化 在上述烧杯中先加入少于所需要量的水,用玻璃棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解,药品完全溶解后,补充水到所需要的总体积。将称量好的 1.8%琼脂放入已溶的药品中,再加热熔化,最后补充所损失的水分。(3)调 PH 在未调 PH 前,先用精密 PH 试纸测量培育基的原始 PH,假如偏酸,用滴管向培育基中逐滴加入 1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用 PH 试纸测基 PH 直到 PH 达到 7.4-7.6。反之用 1mol/L HCl 进行调节。(4)分装将培育基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的1/5,三角烧瓶的量不超过 1/2 加塞 培育基分装完毕后,在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。(5)包扎 加塞后,将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培育基名称、配制日期。(6)灭菌 将上述培育基以 0.1Mpa,121,15min℃高压蒸气灭菌。(7)倒平板 ,取三个已消毒的培育皿,在无菌操作台上用三角烧瓶中的培育基倒制三个平板培育基,冷却。(8)搁置斜面 将灭菌的试管培育基冷却至 50℃左右,将试管口端搁在玻璃棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。2 接种大肠杆菌斜面种子(1) 取实验室储备的大肠杆菌 BL21 种子, 在酒精灯附近,用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。(2) 将接种好的斜面放入 37℃的恒温培育箱子中培育 24h。3 制备平板种子 (1)在无菌条件下,取一支保存的大肠杆菌的斜面,用无菌生理盐水将菌种冲洗下来,再用无菌生理盐水将其梯度稀释为 1 倍,10 倍,100 倍和 1000 倍,用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板,每次吸取溶液100ul),然后在 37℃培育箱中过夜。(12)次日,挑取生长状态好,特征明显的单个菌落,接种于新奇灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培育基中 37℃,170r/min 恒温振荡培育 18h 作种子培育液。其后的实验中,每次实验前从种子培育液中吸取 2ml 菌液接种于新奇灭菌的液体培育基中,37℃,170r/min 恒温振荡培育使用牛肉膏蛋白胨培育基 组成成分:牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl5g...